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        果蝇的唾腺染色体的制片与观察

        互联网

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        一、目的
        通过对果蝇唾腺染色体的观察,了解巨染色体的特征,练习果蝇幼虫解剖技术及唾腺染色体制片方法。
        二、材料
        果蝇三日龄幼虫
        三、原理
        果蝇幼虫期的唾腺细胞核非常大,唾腺染色体比其它细胞的染色体大200多倍。且总是处于前期状态,两条同源染色体间有差别时,很容易看出来。例如,当一条染色体缺失一个片段时,它的同源染色体在这一段不能配对,就会拱起来,形成一个弧状结构。此外,重复、倒位、易位等染色体畸变也可看到,所以唾腺腺染色体是研究染色体畸变的好材料。
        唾腺染色体上有明显的横纹,其相对大小和空间排列是恒定的,可以作为识别唾腺染色体的标志。
        四、实验准备
        1.用具:双筒解剖镜,镊子,解剖针,载玻片,盖玻片,培养皿。
        2.药品:醋酸洋红或醋酸地衣红,冰醋酸,生理盐水0.7%Nacl,1NHC1, 蒸馏 水,无水乙醇。
        五、实验步骤
        1.取一干净的载玻片,其上滴一滴生理盐水,取一三龄幼虫置于生理盐水中,两手各握一枚解剖针,以左手针压住幼虫末端1/3处,另一针揿住幼虫头部,用力向前拉,把头部身体拉开,腺体即随之而出。黑点是它的神经节,唾腺就在神经节的下面。
        2. 低倍显微镜下观察,唾腺是一对棒状的腺体,中间有一细丝相连,腺体由两层规则排列的细胞组成。找到腺体后,用针剔除脂肪。
        3.在载玻片上把幼虫其他部分除去,并用吸水纸吸去生理盐水。
        4.在腺体上滴一滴1NHC1,浸泡2-3分钟,HCL的作用是使组织疏松,易于压片和获得良好的图象。
        5.吸去HCL,滴一滴 蒸馏 水,再用吸水纸吸去,反复两次。
        6.加一滴醋酸洋红(或醋酸地衣红)染液,染色30分钟。
        7.加盖玻片、压片,显微镜观察。
        8.好的片子可以制成永久片,把片子依次移入含有下列溶液的培养皿中,固定液(冰醋酸:酒精=3:1,在固定液中的时间以盖玻片脱下来为准)——纯酒精——纯酒精——二甲苯——二甲苯——加拿大树胶封片。
        9.待封胶干后观察,贴好标签。
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