实验室常用多种缓冲液配置方案
互联网
3965
1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度：1 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度：1.5 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠 (pH5.2)
组份浓度：3M 醋酸钠
配制量：100ml
配制方法：
1.称量40.8g NaAc·3H 2 O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer
组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量下列 试剂 ，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6)10 M 醋酸铵
组份浓度：10 M 醋酸铵
配制量：100 ml
配制方法：
1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
4. 密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7) 苯酚 / 氯仿 / 异戊醇 (25 : 24 : 1)
配制方法：
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8 ） 10 ％ (W/V) SDS
组份浓度：10％ (W/V)SDS
配制量：100ml
配制方法：
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2
3.将溶液定容至100ml后，室温保存。
9 ） 2 N NaOH
组份浓度：2 N NaOH
配制量：100 ml
配制方法：
1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
10 ） 2.5 N HCl
组份浓度：2.5 N HCl
配制量：100 ml
配制方法：
1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。
2. 室温保存。
11 ） 5 M NaCl
组份浓度：5 M NaCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
11 ） 20 ％ (W/V) Glucose
组份浓度：20％ (W/V) Glucose
配制量：100 ml
配制方法：
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
12 ） Solution I( 质粒提取用 )
组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。
13 ） Solution II( 质粒提取用 )
组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS
配制量：500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中
10％ SDS 50ml
2N NaOH 50ml
2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀
3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌
14 ） Solution III( 质粒提取用 )
组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH
配制量：500 ml
配制方法：
1. 称量下列 试剂 ，置于500 ml烧杯中。
2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
15 ） 0.5 M EDTA(pH8.0)
组份浓度：0.5 M EDTA
配制量：1 L
配制方法：
称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
16 ） 1 M DTT
组份浓度：1 M DTT
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料 离心管 内。
2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
17 ） 10 mM ATP
组份浓度：10 mM ATP
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料 离心管 内。
2. 加20 ml的25 mM Tris -HCl（pH8.0)，搅拌溶解。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
组份浓度：1 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
| PH值 | 浓HCl |
| 7.4 | 约70ml |
| 7.6 | 约60ml |
| 8.0 | 约42ml |
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
| 1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0） | 100ml |
| 500mM EDTA(PH8.0) | 20ml |
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度：1.5 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠 (pH5.2)
组份浓度：3M 醋酸钠
配制量：100ml
配制方法：
1.称量40.8g NaAc·3H 2 O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer
组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量下列 试剂 ，置于1 L烧杯中。
| NaCl | 8g |
| KCl | 0.2g |
| Na 2 HPO 4 | 1.42g |
| KH 2 PO 4 | 0.27g |
3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6)10 M 醋酸铵
组份浓度：10 M 醋酸铵
配制量：100 ml
配制方法：
1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
4. 密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7) 苯酚 / 氯仿 / 异戊醇 (25 : 24 : 1)
配制方法：
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8 ） 10 ％ (W/V) SDS
组份浓度：10％ (W/V)SDS
配制量：100ml
配制方法：
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2
3.将溶液定容至100ml后，室温保存。
9 ） 2 N NaOH
组份浓度：2 N NaOH
配制量：100 ml
配制方法：
1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
10 ） 2.5 N HCl
组份浓度：2.5 N HCl
配制量：100 ml
配制方法：
1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。
2. 室温保存。
11 ） 5 M NaCl
组份浓度：5 M NaCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
11 ） 20 ％ (W/V) Glucose
组份浓度：20％ (W/V) Glucose
配制量：100 ml
配制方法：
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
12 ） Solution I( 质粒提取用 )
组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
| 1M Tris-HCl（PH8.0） | 25ml |
| 0.5M EDTA（PH8.0） | 20ml |
| 20％Glucose（1.11M） | 45ml |
| dH 2 O | 910ml |
3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。
13 ） Solution II( 质粒提取用 )
组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS
配制量：500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中
10％ SDS 50ml
2N NaOH 50ml
2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀
3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌
14 ） Solution III( 质粒提取用 )
组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH
配制量：500 ml
配制方法：
1. 称量下列 试剂 ，置于500 ml烧杯中。
| KOAc | 147g |
| CH 3 COOH | 57.5ml |
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
15 ） 0.5 M EDTA(pH8.0)
组份浓度：0.5 M EDTA
配制量：1 L
配制方法：
称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
16 ） 1 M DTT
组份浓度：1 M DTT
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料 离心管 内。
2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
17 ） 10 mM ATP
组份浓度：10 mM ATP
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料 离心管 内。
2. 加20 ml的25 mM Tris -HCl（pH8.0)，搅拌溶解。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
