• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒

        互联网

        2062

        材料:

        1. 缓冲液和溶液:氯仿;NaCl(固体);聚乙二醇(PEG 8000);SM

        2. 酶和缓冲液:胰Dnase I (1mg/ml);胰Dnase I (1mg/ml)于TE中(ph7.6)

        3. 离心机和转子:Sorvall  GSA 转子或相当型号

        4. 专用设备:量筒(2L)

        5. 载体和菌株:大肠杆菌培养物,经λ噬菌体感染和裂解

        方法:

        用PEG沉淀噬菌体颗粒:

        1、  将含有λ噬菌体的裂解培养物冷却至室温,加胰Dnase I和Dnase 至终浓度约为1µ g/ml,室温温育30min。

        2、  每500ml培养物加入29.2固体NaCl(终浓度为1mon/L),搅拌使其溶解。将培养物冰浴1h。

        3、  4℃,11000g(8300r/min于Sorvall GSA转子中)离心10min以去除细胞碎片,将四份培养物的上清混合置于2L的干净量筒中。

        4、  测定所收集上清的总体积,然后转移至2L的烧瓶中,加固体PEG至终浓度为10%(m/V,加500ml上清加50gPEG),于室温用磁力搅拌器慢慢搅拌溶解PEG。

        5、  将噬菌体/PEG溶液转移至聚丙烯离心管中,于冰水浴冷却,至少放置1h以便使噬菌体颗粒发生沉淀。

        6、  4℃,11000g(8300r/min于Sorvall GSA转子中)离心10min以回收沉淀的噬菌体,去上清,将离心管倒过来倾斜放置5min,以便是剩余液体充分流干。用移液器吸取残余的液体。

        用氯仿抽提细菌碎片:

        7、  用一带橡皮球的宽口吸干将噬菌体沉淀轻轻地重悬于SM中(针对步骤3每500ml上清加8ml SM),将离心管倾斜放置,使SM完全覆盖并浸泡噬菌体沉淀,室温放置1h。

        通过加入等体积的氯仿抽提噬菌体悬浮液中的PEG和细胞碎片,温和振荡30s。4℃,3000g(4300r/min于Sorvall GSA转子中)离心15min以分离有机相和亲水相,回收含噬菌体颗粒的亲水相。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序