ScFv表达载体pFUW80的基因图谱
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ScFv表达载体pFUW80的基因图谱
由于单链抗体可以在大肠杆菌中正确装配、表达，而抗体片段在大肠杆菌中的表达具有规模大、速度快和成本低的优点，目前主要利用原核的大肠杆菌表达载体表达单链抗体。
单链抗体基因的设计应设计理想的连接序列(linker)，以保证VH和VL在表达系统中能等摩尔地产生，不干扰VH和VL的自由折叠，并使抗原结合位点处于适当构型，不引起分子动力学改变，尽可能减少蛋白酶攻击及防止单链抗体聚集等。目前最常用的连接序列为具刚性结构的15肽序列(Gly4Ser)3。
在单链抗体的构建中，其C末端可引入His尾、c-yc尾和脂类标签等，以有利于表达产物的检测和纯化。引入亮氨酸拉链、半胱氨酸以及a螺旋等结构，可用于构建双价单链抗体。单链抗体基因与蛋白A、毒素及其他蛋白基因的连接，可构建成具有新功能的杂合抗体基因。用于制备供免疫分析、影像诊断及治疗用的基因工程抗体制剂。
单链抗体的构建可以分为二部分：①抗体分子VH和VL基因的扩增、克隆和测序；②将经过测序验证的VH和VL基因插入单链抗体表达载体(见图 )，利用表达载体的性质进行附着型或外分泌型表达。
ScFv表达载体pFUW80的基因图谱
