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        scfv抗体如何制备

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        CC不C

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        4 个回答

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        Eason老歌迷

        有帮助

        具体可以看看这篇文献”全人源抗狂犬病病毒G蛋白scFv中和抗体制备及活性鉴定”。

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        Dr_劉医生

        有帮助

        单链抗体scfv的制备和培养方案,丁香通也有(见图),你可以修改一下直接用作protocol

        图片描述

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        scFv可在多个表达系统中进行表达,目前比较常用的,是大肠杆菌表达系统和哺乳动物表达系统。通过噬菌体展示技术也可生产得到scFv片段。通过免疫动物实验得到杂交瘤细胞,从中提取cDNA,利用逆转录PCR(RT-PCR)得到全套抗体的重链可变区VH与轻链可变区VL,利用重叠PCR(SOE-PCR)将VH,VL片段拼接扩增得到单链抗体可变区基因片段(scFv)。将scFv基因克隆到合适的噬菌体载体中,电转感受态大肠杆菌,辅助噬菌体超染,得到的上清液即为单链抗体库。以特异性抗原为固相,经3~5轮的“吸附-洗脱-扩增”筛选,即可得到富集的能与抗原特异性结合的单链抗体。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        目前多使用的是噬菌体表面展示技术制备scFv,根据抗体基因的来源,一般将抗体库分成天然抗体库(naive antibody library)、免疫抗体库(immune antibody library)、合成抗体库(synthetic antibody library)以及半合成抗体库(semi-synthetic antibody library)等几类。

        制备过程如下:

        1.抗体基因的克隆及重组。一般利用抗体可变区基因骨架区的特异性简并引物,通过PCR扩增出抗体重链和轻链可变区的基因,通过接头linker拼接成完整的scFv基因。

        2.抗体基因表达载体的构建及表达。扩增成功的scFv基因转入噬菌粒载体,并转化宿主细胞,构建噬菌体单链抗体库。

        3.噬菌体单链抗体库的富集、筛选。通常是用固相化的抗原与噬菌体抗体库孵育,通过数次吸附、洗涤、洗脱、扩增过程,可使特异的噬菌体得到109的富集,每一个噬菌体代表了一个抗体。

        4.scFv单链抗体的可溶性表达。在单链抗体基因构建中,单链抗体基因C末端可引入c-Myc、组氨酸、GST、MBP、脂类标签等,使表达产物更易于检测和纯化。

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