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        免疫荧光组织化学对照实验

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        4601
        免疫荧光组织化学对照实验
         
            为保证免疫荧光组织化学染色的特异性,排除非特异性染色,必须在初次实验时进行对照实验。
         
            (1)直接法需设的对照实验
         
            1)标本自发荧光对照:标本只加PBS或不加PBS,甘油缓冲液封片,荧光显微镜观察应呈阴性荧光,即未见与特异性荧光相似的荧光。
         
            2)抑制实验:可分为二步法和一步法。二步抑制法即在标本上先加未标记的特异性抗体,再滴加标记荧光抗体,结果应呈阴性或明显减弱的荧光。一步抑制法是先将荧光抗体与未标记抗体作适量(未标记抗体多于标记抗体)混合,再滴加在标本上染色,结果应为阴性。一步法较二步法简便而且稳定。为证实此种染色的抑制是由于较多的未标记抗体竞争抑制所致,而不是由于荧光抗体被稀释所致,可用盐水代替未标记抗血清,染色结果应为阳性。
         
            3)阳性对照:用已知阳性标本作直接法免疫荧光染色,结果应呈阳性荧光。
         
            如标本自发荧光对照实验和抑制实验均无荧光或弱荧光,而阳性对照实验和待检测标本均呈强荧光,即为特异性阳性荧光。
         
            (2)间接法需设的对照实验:除与直接法一样设置自发荧光对照、抑制实验和阳性对照实验外,还需设荧光抗体对照实验,即标本只加荧光标记抗体,结果应为阴性。如自发荧光对照、荧光标记抗体对照和抑制实验均阴性,阳性对照和待检测标本均呈强荧光,即为特异性阳性荧光。
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