胶体金标抗体双重染色法
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胶体金标抗体双重染色法
利用两种不同直径的胶体金颗粒标记两种第二抗体，在电镜下进行两种不同抗原的亚细胞定位。基本原则：首先需购买拟研究的两种抗原的特异性抗体
，以及不同直径金颗粒标记的相应第二抗体，然后在同一张载网上分别或同时显示组织细胞内两种抗原所在部位。染色方法主要为包埋后染色，操作步骤与显示单一抗原的包埋后染色程序基本相同，在第一种抗体染色后，再重复上述染色过程，显示另外一种抗原成分。也可分别将两种不同种属来源的特异性抗体(第一抗体)和不同直径胶体金颗粒标记的相应第二抗体
混合，直接孵育，这样可节省重复染色过程所需要的时间，并可减少重复染色带来的污染。
理想的染色结果应背景清洁，金颗粒集中在抗原抗体反应部位。欲获得最佳染色，实验中需注意：
①用高特异性和高亲和力抗体；
②被检组织细胞需含一定量抗原，如抗原太少，则难以被抗体标记；
③漂洗是否彻底是决定实验成功的关键因素之一；
④实验所用各种液体可用0．22um微孔滤器(minipore filter)滤过，各种器皿应清洁。
胶体金标抗体双重染色法电镜图
环氧树脂包埋后免疫电镜胶体金双重标记显示两种抗原的共存（长箭头示大颗粒，短箭头示小颗粒）
