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        胶体金标抗体双重染色法

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        胶体金标抗体双重染色法
         
            利用两种不同直径的胶体金颗粒标记两种第二抗体,在电镜下进行两种不同抗原的亚细胞定位。基本原则:首先需购买拟研究的两种抗原的特异性抗体 ,以及不同直径金颗粒标记的相应第二抗体,然后在同一张载网上分别或同时显示组织细胞内两种抗原所在部位。染色方法主要为包埋后染色,操作步骤与显示单一抗原的包埋后染色程序基本相同,在第一种抗体染色后,再重复上述染色过程,显示另外一种抗原成分。也可分别将两种不同种属来源的特异性抗体(第一抗体)和不同直径胶体金颗粒标记的相应第二抗体 混合,直接孵育,这样可节省重复染色过程所需要的时间,并可减少重复染色带来的污染。
         
            理想的染色结果应背景清洁,金颗粒集中在抗原抗体反应部位。欲获得最佳染色,实验中需注意:
            ①用高特异性和高亲和力抗体;
            ②被检组织细胞需含一定量抗原,如抗原太少,则难以被抗体标记;
            ③漂洗是否彻底是决定实验成功的关键因素之一;
            ④实验所用各种液体可用0.22um微孔滤器(minipore filter)滤过,各种器皿应清洁。
        胶体金标抗体双重染色法
        胶体金标抗体双重染色法电镜图
        环氧树脂包埋后免疫电镜胶体金双重标记显示两种抗原的共存(长箭头示大颗粒,短箭头示小颗粒)
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