• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        质粒DNA提取技术

        互联网

        2518

        实验原理

         

        实验试剂

         

        实验设备

         

        实验材料

         

        实验步骤

         

        1. 将25mL含氨苄青霉素(100μg/mL)的LB液体培养基加入100mL锥形瓶中,接入含R-pGEX-4T-1质粒的大肠杆菌,37℃振荡培养过夜。

        2. 收菌,吸取1.5mL培养物加入1.5mL离心管中,4000r/min室温离心2min。

        3. 吸去培养液,使细菌沉淀尽可能干燥。

        4. 将细菌沉淀悬浮于100μL溶液Ⅰ中,充分混匀,室温放置10min。

        5. 加入200μL溶液Ⅱ(新鲜配制),盖紧盖子,混匀内容物,将离心管放冰上5min。

        6. 加入150μL溶液Ⅲ(冰上预冷),盖紧盖子,颠倒数次使混匀。冰上放置15min。

        7. 12000r/min离心15min,将上清转至另一离心管中。

        8. 向上清中加入等体积酚:氯仿(1:1)(去蛋白),反复混匀,12000r/min离心5min,将上清转至另一离心管中。

        9. 向上清中加入2倍体积无水乙醇,混匀后,室温放置5~10min。

        10. 12000r/min离心5min,倒去上清液,将离心管倒扣在吸水纸上,吸干液体。

        11. 用1mL70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀,振荡,12000r/min离心5min,倒去上清液,空气干燥。

        12. 加20μL纯水(含20μg/mL胰RNA酶),使质粒DNA完全溶解,-20℃保存。

             (注:1mL纯水中加2μL10mg/mL的胰RNA酶配制成溶解质粒的纯水。)

        13. 在下次实验中观察实验结果,通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序