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        Agilent1100液相基本操作步骤

        互联网

        2126

        Agilent1100液相基本操作步骤

        (一)、开机:

            1、打开计算机,进入Windows NT (或Windows 2000)画面,并运行Bootp Server程序。

             2、打开 1100 LC 各模块电源。

             3、待各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online图标,化学工作站自动与1100LC


                 通讯,进入的工作站画面如下所示。

         


         

           4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击View菜单中的“Show Top Toolbar”,“Show status toolbar”,“System diagram”,Sampling diagram,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。

           5、把流动相放入溶剂瓶中。

           6、打开Purge阀。

           7、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入编辑画面。

           8 、设Flow:5ml/min,单击OK。

           9、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump control选项,选中On,单击OK,则系统开始Purge,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。

           10、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump Control选项,选中Off,单击Ok关泵, 关闭

        Purge  valve。

           11、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入Pump编辑画面,设Flow:1.0ml/min。

           12、单击泵下面的瓶图标,如图所示(以二元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。

         


         


         

          

        (二)数据采集方法编辑:

         

           1、开始编辑完整方法:


                从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项,如上图所示选中除“Data    analysis ”外的三项,单击Ok,进入下一画面。

            2、方法信息:

                                       在“Method Comments”中加入方法的信息(如:方法的用途等)。

                                  
        单击Ok 进入下一画面。

         


         

        3、泵参数设定:(以二元泵为例)

          在“Flow”处输入流量,如1ml/min,在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行Timetable ,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。


               单击Ok进入下一画面。

         


         

        4、自动进样器参数设定:

                                       选择合适的进样方式, 如图所示,进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。Standard Injection----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。

         

                                      
        点击Ok进入下一画面。

         

         


         

        5、柱温箱参数设定:

                Temperature下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击more>> 键,如图所示,选中Same as left---使柱温箱的温度左右一致。


                 点击ok进入下一画面。

        6、VWD检测器参数设定:

                Wavelength下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,  Peak width (Response time)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min  (2s)。


                 Timetable 中可以“Insert”一行,输入随时间切换的波长,如1min  ,波长=300nm。点击ok进入下一画面。

         


         

           7、DAD检测器参数设定:

             检测波长: 254nm,BW=30nm,     参比波长=350nm,BW=100nm; 

             检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW: 一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width(Response time):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit狭缝窄,光谱分辨率高;宽时,噪音低。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的灯。


            点击Ok进入下一画面。

        8、                RID检测器参数设定:

            色谱条件:  

        进样体积: 20ul 。      光学单元温度:  Off 。

        极性: 正 。           峰宽(响应时间) :  4s 

          如图所示: Optical Unit Temperature---若环境温度控制在±2℃,设定为Off,  若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peak width”---大多数分析设为4S,只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after analysis”---在不进行分析时可以让流动相循环,节省流动相,检测器连续运行,可随时投入使用。


              Control :Heater 设为On,若要循环流动相,必须将“Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池,将其设为On,并输入Purge 时间。 

         


         

         


         

        9、                FLD检测器参数设定:

         

           色谱条件: 

            样品:P/N 01018-68704  用甲醇稀释为1:10。

             进样体积:5ul。

             柱温箱:  30℃ 。   EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。

             响应时间=4s.     停止时间: 出峰完毕。

             Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。

             Emission:     发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。

             PMT:          大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。

           Peak width”:大多数应用设为4s,只有快速分析采用小的设定值。

             Multi Ex : 多波长及光谱(激发)。

             Multi Em:多波长及光谱(发射)。

            同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。


         

         

         

         

         

         


         

        10、        在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”,单击Ok。

         

         

         


         

         


         

        11、        单击“Method”菜单,选中“Save method as”,输入一方法名,如“test”,单击Ok。

        12、        从菜单 View中选中Online signal ,选中Windows 1,然后单击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中

        Windows 2)。

         

        13、        从“Run  control ”菜单中选择“Sample info”选项,如上图所示,输入操作者名称,在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。


        区别:    Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。   PrefixPrefix 框中输入前缀,在Counter 框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd0001,vwd0002……

         


         

        14、        Instrument 菜单选择System on

        15、        等仪器Ready,基线平稳,从Method菜单中选择“Run method”,进样。

        DAD, VWD色谱图如下所示:)


         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         


         

        (三)、数据分析方法编辑:

        1、  从“View”菜单中,单击“Data analysis”进入数据分析画面。

        2、  从“File”菜单选择“Load signal”,选中您的数据文件名,如下图所示。单击Ok。

        3、 
        做谱图优化,从“Graphics菜单中选择“Signal options”选项,。从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间,单击ok,或选择Use Ranges 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。

         


         

        4、积分:

         (1)、从“Integration”中选择 Auto integrate,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration  Events”选项,选择合适的Slope sensitivity,Peak width,Area reject,Height reject。

         (2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项, 则数据被积分。

         (3)、如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。


         (4)、单击左边“√”图标,将积分参数存入方法。

                                   5、打印报告:

                                 

        (1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项,进入如上画面。

        (2)、单击“Quantitative  Results”框中Calculate右侧的黑三角,选中Percent(面积百分比),其它选项不变。

        (3)、单击Ok.

        (4)、从“Report”菜单中选择“Print report”,则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则单击Report 底部的“Print”钮。


         


         

        (四)、关机:

         

          关机前,用 100%的水冲洗系统20分钟,然后用有机溶剂冲洗系统10分钟(如ACN),然后关泵,(适于反相色谱柱)。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]

          退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shut down关)。

          关掉Agilent 1100电源开关。

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