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        小室液相法

        最新修订时间:

        原理

        溶血空斑试验,又称空斑形成细胞(Plague Forming Cell, PFC)试验,是一种体外检测抗体形成细胞的方法。将一定量洗涤过的绵羊红细胞注射入小鼠腹腔,四天后将小鼠杀死,取脾脏制成脾细胞悬液,内含抗体形成细胞。然后将脾细胞、绵羊红细胞,补体混合孵育。由于PFC 所分泌的抗体和绵羊红血球结合形成抗原抗体复合物,在补体作用下可使红细胞溶解,于特制的小室内形成肉眼可见的溶血空斑。一个空斑即代表一个抗体形成细胞。

        材料与仪器

        步骤

        1.  小鼠免疫及脾细胞悬液的制备
         
        将5 %SRBC0.4 ml注射于小鼠腹腔,4 天后拉脱颈椎处死,取出脾脏放在已加入6 ml Hank's液的平皿中。在100 目不锈钢网上研磨,过滤混匀,从中吸取1 ml加入试管中,加满Hank's液混匀,离心1000 rpm,10 分钟。将沉淀的脾细胞恢复1 ml容积,即为约1x107 /ml浓度的细胞悬液。
         
        2.  制作小室
         
        取无脂载玻片(75 mmx25 mm), 平置桌面上。用双面胶带在载玻片两端和中间各粘一条,然后再覆盖上同样的载玻片,即形成两个小室。将此双层玻片的一侧长边浸入融化的石腊池中以封闭小室的一边(无需浸入过深,以能封闭小室边缘为准)。
         
        3.  小室灌注细胞悬液
         
        取 1x10/ml脾细胞悬液100 ul
        10 %SRBC 200 ul
        新配补体 200 ul
        Hank's液 1 ml
        混匀后,用尖吸管灌注小室、蜡封、标记、平放于玻片盘内,置37 ℃孵箱30-45 分钟。

        注意事项

        1.  小室注入液体时不要留有气泡。
         
        2.  小室边缘需用石蜡封严。

        3.  37℃孵箱孵育时,必须放平,不可倾斜。
         
        4.  观察结果时,应注意辨别空斑与气泡的区别,避免将气泡误认为溶血空斑。

        小室液相法

        常见问题

        一、实验结果
         
        观察小室内的透明空斑,一个空斑即代表一个空斑形成细胞(PFC),即B细胞。

        来源:丁香实验

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