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        【原创】RNA提取的流毒非浅的经典误区(初学者的必看贴)

        丁香园论坛

        2039
        RNA提取的流毒非浅的经典误区(初学者的必看贴)
        最近碰到了好几个RNA提取的初学者来实验室学习如何提取RNA,对于如此简单的操作,却有如此多的人提取不出来,细问一下,原来他们的知识来源都是书本上或者网上的“RNA提取注意事项一类”的所谓经验,其实,他们提取不出来的真正原因,恰恰是他们严格遵守了所谓的经验,精力全放在不需要注意的地方,结果搞得自己很紧张, 真正需要注意的操作反而没有注意了。下面我就结合生物通上常见的RNA 操作注意事项与实验技巧的文章
        (http://www.ebiotrade.com/newsf/2004-3/B2004312163158.htm)指出提取RNA的流毒非浅的常见误区:
        1.“ 如果可能,实验室应辟出专门RNA操作区,离心机、移液枪、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁,并定期进行消毒。”
        完全错误,任何普通的试验台,不需要任何消毒,暴露在空气中就可以。用我的话说就是垃圾堆里面我都可以提取出RNA!有的学生告诉我他们在哪里提取的, 他们在超净台里面操作,只有两个孔伸手进去,操作及其不便,还容易使人疲劳,风干RNA沉淀的时候,也看不清楚,常常造成要么干过头,要么乙醇残留高。
        2.“操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套,并经常更换,以避免将手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带入试管或污染用具。尽量避免使用抛弃式塑料手套。塑料手套不贴身,常常造成操作不便,而且多出部分还容易在器具上遭RNA酶污染并向未污染处传递,扩大污染。
        这是流传最广的错误,因为手上的RNA酶,按照正常的操作,怎么可能带到离心管里面?即使沾到外面了,对里面的RNA酶也完全没有影响啊。除非有人参观,我一般提取RNA根本不注意是否带了手套,戴手套也是为了保护手不沾到苯酚, 而不是怕污染。至于扩大污染一说, 完全是胡扯,试验台上到处是飞沫,手接触后留下的RNA酶,早就污染完全了,再说,它们怎么可能转到小离心管里面?
        3.研钵去干烤。
        不需要,洗干净,晾干就可以了,即使里面有一些RNA酶残留,有液氮的时候如此低的温度下怎么可能降解RNA,转到裂解液后,外源,内源的RNA酶就会被全部抑制。何况,组织里面那么多的RNA酶研磨的时候都不会降解RNA,残留一点在研钵上的RNA酶就会吗?
        4.操作时候戴口罩,帽子,不说话。
        不需要, 除非你提取的时候唾沫横飞, 而且特别准确,有一滴飞入了你手上拿的1.5毫升的离心管。总之,我边提取的时候, 边要和学生大谈,提取RNA如何如何的简单。
        5.用DEPC处理枪头, 小离心管。
        不需要,国外的枪头,离心管散装的,装好在枪头盒里面 ,直接可以用,不需要高压灭菌。国产的我用得不多, 反正我买过浙江产的2分钱一个的离心管,照样不需要DEPC处理,不需要高压,打开了,直接用。总之做不出来, 首先千万不要找枪头,离心管是国产质量不好的原因。当然如果管子里面有残留RNA酶,保存时间不可能很长,建议大家提取后,立刻使用如转膜,或者逆转录,不要存放时间太久。

        大家想一下, 当大家经过了网上如此繁琐的错误的注意事项洗礼的时候,他还能有精力去注意提取RNA的重点和真正应该注意的东西在什么地方吗?
        其实,真正应该注意的就是。。。。。。,我累了,下次说。
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