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        高效转染法

        相关实验:磷酸钙介导的真核细胞转染实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  转染前一天接种呈指数生长的细胞,密度为5×105/10 cm  平板。加10 ml 完全培养液,在开始转染时细胞数应<106/平板,以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。

        2.  用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μl ,4 ℃保存。
         
        3.  将最适量的质粒DNA与500 μl 0.25 mol/l CaCl2混合,加入500 μl 2×BBS中,混匀,室温下温育10~20 min。

        4.  将磷酸钙-DNA溶液逐滴加入培养皿的细胞中,同时晃动培养皿,在35℃ 3%CO2培养箱中温育15~24min。
         
        5.  用5 ml PBS洗细胞两次,加入10 ml 完全培养液。对于稳定转化,在35~37℃ 5%CO2培养箱中培养过夜。对于短暂表达,培养细胞48~72 h。
         
        6.  在开始选择稳定的转化细抱前按1:10至1:30分传细胞。于35~37℃培养箱中培养过夜。
         
        7.  将培养液换成选择培养液,或在适当的选择条件下培养细胞进行选择稳定的转化子。

        来源:丁香实验

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