🔥 SiRNA 转染

小干扰 RNA（siRNA）转染是 RNAi 诱导基因沉默的一种，是基于纳米颗粒、聚合物或脂质体的一种技术。siRNA 是双链小分子，长度为 20~24 个 bp，可特异性地降解同源 mRNA，达到抑制相应基因表达的目的。它可以人工合成，也可在细胞中自然产生，作用一般维持 3~7 天。

（1）准备 siRNA-脂质体复合物：于 3 个 1.5 mL 无菌 EP 管中分别加入 250 μL、250 μL 和 500 μL Opti-MEM 培养基（tube1、tube2 和 tube3），于含 500 μL Opti-MEM 培养基的 tube3 中加入 30 μL LipofectamineTM RNAiMAX，轻柔震荡混匀；于含 250 μL Opti-MEM 培养基的 2 个 EP 管中各加入 tube3 中试剂 250 μL，再分别加入 20 μM 阴性对照 siRNA 和目的 siRNA 各 2.5 μL（具体用量根据个人所需浓度添加），轻柔震荡混匀，室温孵育 5 min；

（2）提前一天准备细胞，按 6-8×10⁵ 个/孔接种于 6 孔细胞培养板中；

（3）细胞培养箱过夜培养，细胞汇合至 70~90%，PBS 润洗，更换新鲜完全培养基；

（4）将上述制备好的 siRNA-脂质体复合物按照 250 μL/孔依次加入 6 孔细胞培养板中，轻摇混匀，记录好转染 siRNA 的类型以及时间；

（5）细胞培养箱中培养 24 h，PBS 润洗，收集细胞验证干扰效果。