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        绿色荧光蛋白融合技术

        相关实验:绿色荧光蛋白融合技术在激素类兴奋剂检测中的应用

        最新修订时间:

        原理

        重组人生长激素(rhGH)与胰岛素生长因子-1(ICF-Ⅰ)是目前运动员滥用严而又难以检测的内源性激素类兴奋剂。以IGF-Ⅰ作为目标分析物,利用分子生物学方法构建绿色荧光蛋白(GFP)与IGF-Ⅰ的融合蛋白GFP-IGF。GFP是目前应用广泛的一种生物报告分子,具有稳定、无毒害、无需底物和辅助因子即可自发荧光等特性,是一种极具潜力的标记物。

        材料与仪器

        步骤

        1. 通过基因重组,构建表达融合蛋白GFP-IGF的大肠杆菌重组菌。


        2. 纯化融合蛋白,经SDS-PAGE分析为单一条带,分子量36KD。


        3. Western印迹与ELISA,验证融合蛋白能特异性地与IGF-1抗体反应,具有IGF-1的抗原性。


        4. 表面等离子体共振(SPR)分析,得到GFP-IGF与IGF-1单抗的KD=2.6X10-8M,符合免疫的要求。


        5. CD光谱、荧光光谱、荧光寿命分析表明融合蛋白保持了GFP的荧光特性。

        注意事项

        1. 注意分子操作的规范。


        2. 蛋白纯化应在低温进行。

        常见问题

        来源:《绿色荧光蛋白融合技术在激素类兴奋剂检测中的应用》

        来源:丁香实验

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