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        【求助】弱问关于核蛋白表达

        丁香园论坛

        1850
        我要做一个药对某核蛋白的表达影响(是下调或上调)
        除了提核蛋白用western外
        有其他方法么?
        免疫细胞法可以定量么?说明的了问题么?
        请各位师兄师姐们指教啊~~~~~
        说具体点,什么药对哪种核蛋白的影响?
        joeyeong wrote:
        我要做一个药对某核蛋白的表达影响(是下调或上调)
        除了提核蛋白用western外
        有其他方法么?
        免疫细胞法可以定量么?说明的了问题么?
        请各位师兄师姐们指教啊~~~~~


        免疫细胞法后通过荧光显微镜观察吗? 这个只能定性,还要看这个核蛋白在不加药物刺激的时候表达情况高低,有一定的局限性。
        建议你用流式分选,固定细胞后抗体标记染色上流式,细微的荧光强弱都能被检测出来,你可以定量地知道同样的细胞数目有多少个细胞是显示该核蛋白表达量发生了变化。
        其次药物对核蛋白的影响也许不仅仅表达变化那么简单,还有该核蛋白是否会有磷酸化的过程?如果有也需要检测不同时间点是否有磷酸化的变化,这个在收蛋白样的时候要注意磷酸化蛋白被降解的情况。
        再者,检测药物对核蛋白的表达,可以通过EMSA的实验间接证明,比如该核蛋白已知一段binding site,你可以通过公司合成该片段,同位素标记(对于比较出名的序列公司有卖荧光标记的,比同位素貌似更安全),通过放射自显影的强度来证明核蛋白表达是否上调或者下调,很有说服力的一个体外实验。
        谢谢啊~~~~^^

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

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