【求助】NF-kb
丁香园论坛
4021
我想做nf-kb的激活，请问如果我只用western 做Ikba和p-Ikba的半定量检测可以么？
可以，做完WB后用Image软件经行成像分析，可以半定量检测。园子里有很多这方面的帖子，你可以看看。
pmlt wrote:
我想做nf-kb的激活，请问如果我只用western 做Ikba和p-Ikba的半定量检测可以么？
细胞因子 wrote:
可以，做完WB后用Image软件经行成像分析，可以半定量检测。园子里有很多这方面的帖子，你可以看看。
楼主的这种情况，只用western 做Ikba和p-Ikba的半定量检测是不可以的，或者说是不严谨的。
首先，你要知道Nf-kb的激活通常与IkBs（IkBa、IkBβ、IkBε）的降解降解有关，但这并不绝对，也不是其唯一的途径，比如P50、p65的表达调节也可影响Nf-kb，况且IkBs还可细分为三种类型。在不知道自身实验具体机制的前提下，选择其中的可能来做WB，这种情况只能说是在验证，就衡量NF-kb的活化程度而言，无法达到定量的标准和级别。
最好做EMSA检测NF-kb的活化程度，或者用报告基因的方法也行，这是最直接的。再不行就用western做NF-kb的转位。当然，NF-kb的上游IkB-a，IKKa/b以及下游的iNOS和COX-2也要做。另外还要做NO，PGE-2，IL，TNF以及ROS等炎性因子检测，以及MAPK（ERK，JNK，p38）的表达。这样做就完整了。
不好意思，ERK与NF-kB通路的关联是什么呢？
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
