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        【求助】逆转录病毒、慢病毒载体与其他真核表达载体在稳定筛选时的区别?

        丁香园论坛

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        逆转录病毒和慢病毒载体经包装后可以得到携带外源基因的病毒,将病毒感染细胞后,外源基因可以整合到细胞基因组中,经过稳定的筛选后,就可以得到稳定表达外源基因的细胞。
        而一些真核表达载体如pcDNA3.1经脂质体转染进细胞后,也可以整合到细胞基因组中,并经过G418的筛选后,也可以得到稳定表达外源基因的细胞。我就很困惑:这两者有什么区别?用逆转录病毒或慢病毒载体的优势在哪?如果我想得到能稳定表达某一基因的骨髓基质干细胞,是不是用pcDNA3.1等一些真核表达载体就行了还是选择慢病毒载体更好?
        1. 在慢病毒载体中,由哺乳动物细胞翻译后的再加工修饰产生的外源蛋白,在活性方面远胜于原核表达系统及酵母、昆虫细胞等真核表达系统,表达的外源蛋白更加的接近天然蛋白。

        2. 真核表达质粒的转染对于分裂增殖比较旺盛的体外培养细胞转染效果较好,但表达的目的基因常常随时间的延长而发生丢失。与真核表达质粒相比,病毒载体介导的基因转移可以整合入宿主的基因组中,具有更好的稳定性。最初研究的鼠干细胞病毒和后来的腺病毒载体在转染分裂增殖旺盛期的细胞时都取得了较好的效果,但对于分裂增殖缓慢和处于静息期的细胞基因转染的效果却不尽人意。慢病毒载体出现以后,先后在造血干细胞,胚胎干细胞,以及在体的神经胶质细胞,神经元的基因转移中都取得了成功。
        因为慢病毒载体可以整合分裂期和非分裂期的细胞基因组中
        正为此问题而困扰呢,太给力了!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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