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        血浆凝血酶原时间测定操作规程(检验SOP)

        互联网

        4028

        一、项目名称:
        血浆凝血酶原时间测定(prothrombin time ,PT)

        二、检验方法名称:
        凝结法

        三、方法学原理:
        在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后,加入试剂。加入试剂后,采用波长为660nm的光照射样本。凝血过程(纤维蛋白原转化为纤维蛋白)中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定,可以做出凝血曲线,通过Percentage Detection Method法求得凝血时间。

        四、方法学溯源:
        凝血酶原时间(PT)测定是Quick于1935年创立的。在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶(人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液)和钙离子,使凝血酶原变为凝血酶,后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需要的时间即凝血酶原时间。其凝固时间取决于凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。该试验是反映外源凝血系统最常用的筛选试验。

        五、仪器:
        (一)型号:Sysmex  CA—1500自动血液凝血分析仪
        (二)分析和计算参数:
        1.处理量:约120个测试/小时
        2.所需样本量:50μl
        3.检验时间:在最长检验时间之内测出结果,典型最长检验时间:100秒
        4.重复性:CV≤2%
        5.计算参数:凝血酶原活动度(PT%)
                     凝血酶原比值(PT R)
                     国际标准化比值(INR)

        六、试剂及配套品:
        (一)试剂:
        1. 凝血活酶含钙试剂(Thromborel® S)
        (1)商标:德灵(DADE BEHRING)
        (2)包装规格:Pack for 10×4ml
        (3)代码:No.OUHP 29 , or
        (4)参数:ISI(国际敏感度指数)=0.97
        (5)成分:
        1)Thromborel® S  Reagent :
        a. 冻干人胎盘促凝血酶原激酶(lyophilized human placental thromboplastin)
        b. 氯化钙 (calcium chloride)
        c. 稳定剂 (stabilizers)
        2) 防腐剂(Preservatives):
        a.庆大霉素(Gentamicin)(0.1g/L)
        b. 5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(5-chloro-2-methyl-4-isothiazol-3-one and 2-methyl-4-isothiazol-3-one)(最大量 20mg/L)
        2.佛罗那巴比妥缓冲液(Dade® Owren'S  Veronal Buffer)
        (1)商标:德灵(DADE BEHRING)
        (2)包装规格:Pack for 10×10ml
        (3)代码:B4234-25
        (4)成分:
        1)2.84×10­²M的巴比妥钠 (sodium barbital)
        2)1.25×10­¹M的氯化钠 (sodium chloride)
        3) PH 7.35±0.1
        3. 清洗液(Cleaning)
        2%次氯酸钠溶液(自配)
        (二)配套品:
        1.标准血浆(Standard Human Plasma)
        (1) 商标:德灵(DADE BEHRING)
        (2) 代码:No. ORKL
        2.校准质控血浆(Ci-Trol®)
        (1) 商标:德灵(DADE BEHRING)
        (2) 代码:Level 1, B4244-10
                  Level 2, B4244-20
                  Level 3, B4244-30
        3.质控血浆(Control Plasma)
        (1) 商标:太平洋(Pacific Hemostasis)
        (2) 代码及规格:Level 1 (Normal), 100595  10×1ml
                        Level 2 (Abnormal), 100596  10×1ml
                        Level 3 (Abnormal), 100597  10×1ml

         

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