【求助】急，关于信号通路的实验方案问题。
丁香园论坛
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我先简单汇报一下实验内容：我想研究某一刺激因素上调粘蛋白的信号通路，准确的说就是找到哪一条即可，不需要深入研究。
我的思路如下：
1，加入刺激因素后，让rt－pcr和wb证明粘蛋白表达增加。
2，文献检索得知，粘蛋白主要有3条通路
3，加入刺激因素后，分别检测3条通路中标志蛋白是否升高，升高的即可能 为通路；然后在这条可能的通路中加阻断剂，看是否阻断；这样即可找到通路。
4，或者，第三条不要，直接到4，加入刺激因素后，直接加阻断剂，看哪条阻断，哪条即可能是通路。
我的实验设计对吗？紧急求助
我的思路如下：
1，加入刺激因素后，让rt－pcr和wb证明粘蛋白表达增加。
2，文献检索得知，粘蛋白主要有3条通路
3，加入刺激因素后，分别检测3条通路中标志蛋白是否升高，升高的即可能 为通路；然后在这条可能的通路中加阻断剂，看是否阻断；这样即可找到通路。
4，或者，第三条不要，直接到4，加入刺激因素后，直接加阻断剂，看哪条阻断，哪条即可能是通路。
我的实验设计对吗？紧急求助
再问，没人知道吗
sunyong_97 wrote:
我先简单汇报一下实验内容：我想研究某一刺激因素上调粘蛋白的信号通路，准确的说就是找到哪一条即可，不需要深入研究。
我的思路如下：
1，加入刺激因素后，让rt－pcr和wb证明粘蛋白表达增加。
2，文献检索得知，粘蛋白主要有3条通路
3，加入刺激因素后，分别检测3条通路中标志蛋白是否升高，升高的即可能 为通路；然后在这条可能的通路中加阻断剂，看是否阻断；这样即可找到通路。
4，或者，第三条不要，直接到4，加入刺激因素后，直接加阻断剂，看哪条阻断，哪条即可能是通路。
我的实验设计对吗？紧急求助
如果我设计的话，
１做完后，直接到４，然后如果４出来了，再回头到３
只是顺序问题，论文中还是要包含３中提到的３条通路的变化数据，哪怕是阴性或假阳性。
如果出现假阳性，反而更有价值，因为还可以继续深入，为什么你的某一刺激因素会出现有别与其他刺激的这种假阳性结果。如果能证明啥出来，那么这个论文的价值会进一步提升。
谢谢chuckdouble的回复，学习了。
sunyong_97 wrote:
我先简单汇报一下实验内容：我想研究某一刺激因素上调粘蛋白的信号通路，准确的说就是找到哪一条即可，不需要深入研究。
我的思路如下：
1，加入刺激因素后，让rt－pcr和wb证明粘蛋白表达增加。
2，文献检索得知，粘蛋白主要有3条通路
3，加入刺激因素后，分别检测3条通路中标志蛋白是否升高，升高的即可能 为通路；然后在这条可能的通路中加阻断剂，看是否阻断；这样即可找到通路。
4，或者，第三条不要，直接到4，加入刺激因素后，直接加阻断剂，看哪条阻断，哪条即可能是通路。
我的实验设计对吗？紧急求助
浅谈一下个人的观点：
思路大体是正确的，步骤3很重要，4可以没有，但不能没有3！
4存在一个严重的错误，记住：研究信号通路，抑制剂/阻断剂一般应该预选加入（预处理），即加在刺激因素之前。
sunyong_97 wrote:
非常感谢，3如果很重要，那么我是先做步骤4呢，还是先做3呢？谢谢
sunyong_97 wrote:
感谢各位的帮助，这个信号通路问题是我标书的最后一个部分，所占比例很少。只是想找到哪一条通路即可，所以我只想做步骤1，2，4，不做3了，这样好像也能找到信号通路啊。不知道这样可行吗？
如果您真的想搞科研的话，没有3的话又何谈4呢！？
仔细想想，直接做4：无论您的研究与那些信号通路是否有关，你加入阻断剂的话是会在“一定程度上”产生阻断的，因为那是阻断剂、抑制剂嘛！大家公认的！记住，阻断剂的主旨作用不是看信号通路中的关键蛋白是否有变化，而是要与相关的后续效应或现象相结合，去推测、去解释。
我希望您能理解我的意思，仅供参考。
doctormy wrote:
浅谈一下个人的观点：
思路大体是正确的，步骤3很重要，4可以没有，但不能没有3！
4存在一个严重的错误，记住：研究信号通路，抑制剂/阻断剂一般应该预选加入（预处理），即加在刺激因素之前。
非常感谢，3如果很重要，那么我是先做步骤4呢，还是先做3呢？谢谢
doctormy wrote:
浅谈一下个人的观点：
思路大体是正确的，步骤3很重要，4可以没有，但不能没有3！
4存在一个严重的错误，记住：研究信号通路，抑制剂/阻断剂一般应该预选加入（预处理），即加在刺激因素之前。
我觉得楼主的意思是
１，先看刺激下几条已知通路的marker呢？
２，在看上面已知marker之前先用阻断剂阻断后看phenotype的变化再说。
而不是在具体实验protocol里面什么时候加。
仅仅是个人的理解。
:)
感谢各位的帮助，这个信号通路问题是我标书的最后一个部分，所占比例很少。只是想找到哪一条通路即可，所以我只想做步骤1，2，4，不做3了，这样好像也能找到信号通路啊。不知道这样可行吗？
楼主的４就是这个意思吧？
但是这样做还有一个对照要设，就是要做basal的比较。
但是这样做还有一个对照要设，就是要做basal的比较。
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