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        细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

        互联网

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        . 常用设备

        准备室的设备:

        单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。

        配液室的设备:

        扭力天平和电子天平(称量药品)、PH 计(测量培养用液PH 值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。

        培养室的设备

        液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃ )、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。必须放在无菌间的设备 :离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2 孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃ 冰箱(放置serum 和培养用液)。

        . 无菌操作

        无菌室的灭菌:

        1. 定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 %过氧乙酸 擦拭。

        2.CO2 孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰ 新洁尔灭擦拭,然后用75 %酒精擦拭或者0.5 %过氧乙酸,再用紫外灯照射

        3. 实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30 分钟

        4. 实验后灭菌:用75 %酒精(3‰ 新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

        实验人员的无菌准备

        1. 肥皂洗手。

        2. 穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋

        3. 75 %酒精棉球擦净双手。

        无菌操作的演示:

        1. 凡是带入超净工作台内的酒精、PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75 %酒精擦拭瓶子的外表面

        2. 靠近酒精灯火焰操作。

        3. 器皿使用前必须过火灭菌

        4. 继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。

        5. 各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。

        6. 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。

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