悬浮细胞在细胞培养瓶中的接种

淋巴样细胞通常呈悬浮状生长。常用的培养液为含 10%~15%FBS 的 RPMI1640 各种细胞系间最佳接种密度和平台期细胞密度各不相同。当培养一种新的细胞系时其最佳原则为按 1:2 和 1:4 的比例传代细胞，在 3~4 天时间内进行细胞计数以计算每毫升细胞数。细胞在传代后 24~36 小时细胞数会翻倍。传代细胞密度太低，细胞容易死亡，反映出细胞在达到增长前有较长滞留期。一旦细胞适应实验室的培养条件冉决定备细胞株的最佳接种密度。细胞每毫升接种数量可从 5x10 ⁴ ~8x10⁵ 不等培养液 PH 下降呈现黄色，表明细胞已达到最大密度需要进行换液或传代培养。 

悬浮生长细胞传代一般只需简单稀释操作即可，若需完全更换培养液只需低速离心沉淀，再悬于合适的培养液中即可。

1、 如果细胞未在转瓶中培养，只需摇晃、刮取或胰蛋白酶处埋（见下文“胰蛋白酶处理分离细胞”）即可将细胞从细胞瓶表面分离下来。

2、轻轻地吹打细胞（移液管上下吹打），将细胞团吹散。

3、取1ml 细胞悬液进行细胞计数，勿让细胞沉积在瓶底。轻轻来回转动细胞瓶使细胞处于悬浮状态。

4、稀释细胞，使其终浓度约为每毫升 2x10⁵~4x10⁵。

5、进行细胞计数，并用台盼蓝排斥试验进行细胞活力检测，操作方案见下文“细胞计数”。

注意无菌操作，操作前用酒精擦拭双手。

悬浮细胞培养的优点：繁殖速度快、可以培养出龄期均一的细胞集团。

来源《细胞实验指南（上册)》作者：黄培堂。