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        40种常用细胞培养基配方

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        细胞培养基的配制 细胞培养专题

        31营养琼脂

        成分:

        蛋白 胨 10g

        牛肉膏 3g

        氯化钠 5g

        琼脂 15~20g

        蒸馏水 1000mL

        制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。

        注:此培养基 可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。

        32营养肉汤

        成分:

        蛋白陈 10g

        牛肉膏 3g

        氯化钠 5g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.4

        制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121℃高压灭菌15min。

        33 乳糖胆盐发酵管

        成分:

        蛋白胨 20g

        猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g

        乳糖 10g

        0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL

        蒸馏水 1000mL

        pH7.4

        制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。

        注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

        34乳糖发酵管

        成分:

        蛋白胨 20g

        乳糖 10g

        0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL

        蒸馏水 1000mL

        pH7。4

        制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。

        注:①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

        ②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。

        35 EC肉汤

        成分:

        胰蛋白胨 20g

        3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g

        乳糖 5g

        磷酸氢二钾 4g

        磷酸二氢钾 1.5g

        氯化钠 5g

        蒸馏水 1000mL

        制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min,最终pH为6.9%26plusmn;0.2。

        36 缓冲蛋白胨水(BP)

        成分:

        蛋白胨 10g

        氯化钠 5g

        磷酸氢二钠(Na2HPO4%26bull;12H2O) 9g

        磷酸二氢钾 1.5g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.2

        制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。

        注:本培养基供沙门氏菌前增菌用。

        37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)

        甲液

        胰蛋白胨 5g

        氯化钠 8g

        磷酸二氢钾 1。6g

        蒸馏水 1000mL

        乙液

        氯化镁(化学纯) 40g

        蒸馏水 100mL

        4。13.3 丙液

        0。4%孔雀绿水溶液。

        制法:分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可。

        注:本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。

        38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)

        基础培养基

        多胨或眎胨 5g

        胆盐 1g

        碳酸钙 10g

        硫代硫酸钠 30g

        蒸馏水 1000mL

        碘溶液

        碘 6g

        碘化钾 5g

        蒸馏水 20mL

        制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL。分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL。

        39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)

        基础液:

        蛋白胨 10g

        牛肉膏 5g

        氯化钠 3g

        碳酸钙 45g

        蒸馏水 1000mL

        将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正pH至7.0%26plusmn;0.1,121℃高压灭菌20min。

        硫代硫酸钠溶液

        硫代硫酸钠(Na2S2O3%26bull;5H2O) 50g

        蒸馏水 加至100mL

        碘溶液

        碘片 20g

        碘化钾 25g

        蒸馏水加至 100mL

        将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规 定量。贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用。

        煌绿水溶液

        煌绿 0.5g

        蒸馏水 100mL

        存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。

        牛胆盐溶液

        干燥的牛胆盐 10g

        蒸馏水 100mL

        煮沸溶解,121℃高压灭菌20min。

        制备:

        基础液 900mL

        硫代硫酸钠溶液 100mL

        碘液 20mL

        煌绿溶液 2mL

        牛胆盐溶液 50mL

        临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL。

        40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

        成分:

        蛋白胨 5g

        乳糖 4g

        亚硒酸氢钠 4g

        磷酸氢二钠 5.5g

        磷酸二氢钾 4.58

        L-胱氨酸 0.01g

        蒸馏水 1000mL

        1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成。

        制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合。再加入1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,pH应为7.0%26plusmn;0.1。

        41 GN增菌液

        成分:

        胰蛋白胨 20g

        葡萄糖 1g

        甘露醇 2g

        柠檬酸钠 5g

        去氧胆酸钠 0.5g

        磷酸氢二钾 4g

        磷酸二氢钾 1.5g

        氯化钠 5g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.0

        制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶225mL,115℃高压灭菌15min。

        42 肠道菌增菌肉汤

        成分:

        蛋白胨1 10g

        葡萄糖 5g

        牛胆盐 20g

        磷酸氢二钠 8g

        磷酸二氢钾 2g

        煌绿 0.015g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.2

        制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶30mL,115℃高压灭菌15min。

        43 亚硫酸铋琼脂(BS)

        成分:

        蛋白胨 10g

        牛肉膏 5g

        葡萄糖 5g

        硫酸亚铁 0.3g

        磷酸氢二钠 4g

        煌绿 0.025g

        柠檬酸铋铵 2g

        亚硫酸钠 6g

        琼脂 18~20g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.5

        制法:

        1 将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。

        2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。

        3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃

        4 将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀。冷至50~55℃,倾注平皿。

        注:此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热。以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。超过48h不宜使用。

        44 DHL琼脂

        成分:

        蛋白胨 20g

        牛肉膏 3g

        乳糖 10g

        蔗糖 10g

        去氧胆酸钠 1g

        硫代硫酸钠 2.3g

        柠檬酸钠 1g

        柠檬酸铁铵 1g

        中性红 0.03g

        琼脂 18~20g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.3

        制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH。 再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50~55℃,倾注平板。

        45 HE琼脂

        成分:

        脙胨 12g

        牛肉膏 3g

        乳糖 12g

        蔗糖 12g

        水杨素 2g

        胆盐 20g

        氯化钠 5g

        琼脂 18~20g

        蒸馏水 1000mL

        0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL

        Andrade指示剂 20mL

        甲液 20mL

        乙液 20mL

        pH7.5

        制法:将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内,加热溶解。加入 甲液和乙液于基础液内,校正pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50~55℃,倾注平板。

        注:①此培养基不可高压灭菌。

        ②甲液的配制

        硫代硫酸钠 34g

        柠檬酸铁铵 4g

        蒸馏水 100mL

        ②乙液的配制

        去氧胆酸钠 10g

        蒸馏水 100mL

        ②Andrade指示剂

        酸性复红 0.5g

        1mol/L氢氧化钠溶液 16mL

        蒸馏水 100mL

        将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。

        46 SS琼脂

        基础培养基:

        牛肉膏 5g

        眎胨 5g

        三号胆盐 3.5g

        琼脂 17g

        蒸馏水 1000mL

        再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用。

        完全培养基:

        基础培养基 100mL

        乳糖 10g

        柠檬酸钠 8.5g

        硫代硫酸钠 8.5g

        10%柠檬酸铁溶液 10mL

        1%中性红溶液 2.5mL

        0.1%煌绿溶液 0.33mL

        加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。

        注:①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用。

        ②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。

        ③可以购用SS琼脂的干燥培养基。

        47 WS琼脂

        成分:

        ②胨 12g

        牛肉膏 3g

        氯化钠 5g

        乳糖 12g

        蔗糖 12g

        十二烷基硫酸钠 2g

        琼脂 15g

        Andrade指示剂 20mL

        0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL

        甲液 20mL

        蒸馏水 1000mL

        pH7.0

        制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色。

        注:①供沙门氏菌分离用。

        ②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。

        48 麦康凯琼脂

        成分:

        蛋白胨 17g

        眎胨 3g

        猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g

        氯化钠 5g

        琼脂 17g

        蒸馏水 1000mL

        乳糖 10g

        0.01%结晶紫水溶液 10mL

        0.5%中性红水溶液 5mL

        制法:

        1 将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.2。将琼脂加入600mL

        加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。

        2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。

        注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

        49 伊红美蓝琼脂(EMB)

        成分:

        蛋白胨 10g

        乳糖 10g

        磷酸氢二钾 2g

        琼脂 17g

        2%伊红Y溶液 20mL

        0.65%美蓝溶液 10mL

        蒸馏水 1000mL

        pH7.1

        制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。

        50三糖铁琼脂(TSI)

        成分:

        蛋白胨 20g

        牛肉膏 5g

        乳糖 10g

        蔗糖 10g

        葡萄糖 1g

        氯化钠 5g

        硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2?6H2O〕 0.2g

        硫代硫酸钠 0.2g

        琼脂 12g

        酚红 0.025g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.4

        制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。

        51 三糖铁琼脂(换用方法)

        成分:

        蛋白胨 15g

        眎胨 5g

        牛肉膏 3g

        酵母膏 3g

        乳糖 10g

        蔗糖 10g

        葡萄糖 1g

        氯化钠 5g

        硫酸亚铁 0.2g

        硫代硫酸钠 0.3g

        琼脂 12g

        酚红 0.025g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.4

        制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用。

        52 克氏双糖铁琼脂(KI)

        上层培养基成分

        血消化汤(pH7.6) 500mL

        琼脂 6.5g

        硫代硫酸钠 0.1g

        硫酸亚铁铵 0.1g

        乳糖 5g

        0.2%酚红溶液 5mL

        下层培养基成分

        血消化汤(pH7.6) 500mL

        琼脂 2g

        葡萄糖 1g

        0.2%酚红溶液 5mL

        制法:

        1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。

        2 分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm%26times;100mm试管内,每管约2mL。115℃高压灭菌10min。

        3 将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。

        4 当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL,放成斜面。

        53 克氏双糖铁琼脂(换用方法)

        成分:

        蛋白胨 20g

        牛肉膏 3g

        酵母膏 3g

        乳糖 10g

        葡萄糖 1g

        氯化钠 5g

        柠檬酸铁铵 0.5g

        硫代硫酸钠 0.5g

        琼脂 12g

        酚红 0.025g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.4

        制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。

        54 葡萄糖半固体发酵管

        成分:

        蛋白胨 1g

        牛肉膏 0.3g

        氯化钠 0.5g

        1。6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL

        葡萄糖 1g

        琼脂 0.3g

        蒸馏水 100mL

        pH7.4

        制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正pH后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌121℃ 15 min。

        55 5%乳糖发酵管

        成分:

        蛋白胨 0.2g

        氯化钠 0.5g

        乳糖 5g

        2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL

        蒸馏水 100mL

        pH7.4

        制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。

        注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。

        56 CAYE培养基

        此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用Honda氏产毒肉汤。

        57 Honda氏产毒肉汤

        成分:

        水解酪蛋白 20g

        酵母浸膏粉 10g

        氯化钠 2.5g

        磷酸氢二钠 15g

        葡萄糖 5g

        微量元素 0.5mL

        蒸馏水 1000mL

        pH7.5

        制法:溶解后校正pH,高压灭菌121℃ 15min,待冷至45~50℃时,加入林可霉素溶液,每毫升培养基内含90%26mu;g。

        微量元素配方:硫酸镁 5g,氯化铁 0.5g,氯化钻 2g,蒸馏水 100mL

        58 Elek氏培养基(毒素测定用)

        成分:

        胨 20g

        麦芽糖 3g

        乳糖 0.7g

        氯化钠 5g

        琼脂 15g

        40%氢氧化钠溶液 1.5mL

        蒸馏水 1000mL

        pH7.8

        制法:用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合,分装试管10mL或20mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。

        59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基

        成分:

        甲液:胰蛋白胨 10g

        蒸馏水 1000mL

        乙液:磷酸氢二钠 9.5g

        蒸馏水 1000mL

        丙液:氯化镁(MgCl2%26bull;6H2O) 40g

        蒸馏水 400mL

        以上分别在121℃灭菌15min。

        丁液:孔雀绿 0.2g

        蒸馏水 100mL

        戊液:羧苄青霉素 1mg/mL

        制法:取甲液620mL,乙液160mL,丙液212mL混合,再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL,即为1000mL培养基。分装灭菌烧瓶,每瓶100mL,或灭菌试管10mL。

        60 胰蛋白胨水

        成分:

        胰蛋白胨 10g

        蒸馏水 1000mL

        pH7.0

        制法:将上述成分溶解,校正pH。分装试管,121℃高压灭菌15min。

        61 Rustigian氏尿素培养液

        成分:

        尿素 20.0g

        酵母浸膏 0.1g

        磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.091g

        磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.095g

        酚红 0.01g

        蒸馏水 1000mL

        制法:将上述成分:于蒸馏水中溶解,校正pH为6.8%26plusmn;0.2。 不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管 中,每管为约3mL。

        用途:尿素酶试验用。

        62 氯化钠结晶紫增菌液

        成分:

        蛋白胨 20g

        氯化钠 40g

        0.01%结晶紫溶液 5mL

        蒸馏水 1000mL

        pH9.0

        制法:

        除结晶紫外,其他按上述成分:配好,加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4。5mL,校正pH。加热煮沸,过滤。再加入结晶紫溶液,混合后分装试管。121℃高压灭菌15min。

        63 氯化钠蔗糖琼脂

        成分:

        蛋白胨 10g

        牛肉膏 10g

        氯化钠 50g

        蔗糖 10g

        琼脂 18g

        0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL

        蒸馏水 1000mL

        pH7.8

        制法:将牛肉膏,蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热溶解,过滤。加入指示剂,分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在100mL培养基内加入蔗糖1g,加热溶化并冷至50℃,倾注平板。

        64 嗜盐菌选择性琼脂

        成分:

        蛋白胨 20g

        氯化钠 40g

        琼脂 17g

        0.01%结晶紫溶液 5mL

        蒸馏水 1000mL

        pH8.7

        制法:除结晶紫和琼脂外,其他按上述成分配好,校正pH。加入琼脂,加热溶解。再加入结晶紫溶液,分装烧瓶,每瓶100mL。

        65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂

        成分:

        三糖铁琼脂 1000mL

        氯化钠 30g

        制法:按前面三糖铁琼脂,再加入氯化钠30g,分装试管,121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。

        66 氯化钠血琼脂

        成分:

        酵母膏 3g

        蛋白胨 10g

        氯化钠 70g

        磷酸氢二钠 5g

        甘露醇 10g

        结晶紫 0.001g

        琼脂 15g

        蒸馏水 1000mL

        制法:调pH8.0加热30min(不必高压),待冷至45℃左右时,加入新鲜人或兔血(5%~10%)混合均匀,倾注平皿。

        67 3.5%氯化钠生化试验培养基

        成分及制法:根据所需糖的种类按3.2配制。只是将氯化钠含量改为3.5%,pH为7.7。

        68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)

        成分:

        磷酸氢二钠(Na2HPO4 8.23g

        磷酸二氢钠(NaH2PO4?H2O) 1.2g

        氯化钠(NaCl) 5.0g

        三号胆盐 1.5g

        山梨醇 20g

        制法:将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中,再加入三号胆盐及山梨醇,溶解后校正pH为7.6,分装试管,于121℃高压灭菌15min,备用。

        69 CIN-1培养基

        基础培养基

        胰胨 20.0g

        酵母浸膏 2.0g

        甘露醇 20.0g

        氯化钠 1.0g

        去氧胆酸钠 2.0g

        硫酸镁(MgSO4?7H2O) 0.01g

        琼脂 12.0g

        蒸馏水 950mL

        pH7.5±0.1

        将基础培养基高压灭菌。

        Irgasan

        以95%的乙醇作溶剂,溶解二苯醚,配成0。4%的溶液,待基础液冷至80℃时,加入1mL混匀。

        冷至50℃时,加入:

        中性红(3mg/mL) 10.0mL

        结晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL

        头孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL

        新生霉素(0.25mg/mL) 10.0mL

        最后不断搅拌着加入10.0mL的10%氯化锶,倒平皿。

        70 嗜盐性试验培养基

        成分:

        蛋白胨 2g

        氯化钠 按不同量加

        蒸馏水 100mL

        pH7.7

        制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min。

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