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        正常人食管黏膜上皮细胞培养

        互联网

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        实验材料:

        1. 一般采用活检时获得的正常食管黏膜组织

        2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×HBSS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和1.5g/L庆大霉素,pH7.4

        3. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊

        4. 离心管(15ml、50ml)

        实验方法:

        1. 食管黏膜组织放入HBSS中,在解剖显微镜下分离黏膜与黏膜下组织,用HBSS冲洗2-3次,将黏膜剪成约1mm3 大小的组织块。

        2. 将植块放入培养皿中,上皮面朝下;也可在培养皿内放入盖玻片,将组织块放在盖玻片上培养。

        3. 当组织块贴壁后,加入适量培养液,培养液的量为能湿润组织块但不使组织块浮起为宜,在37℃、5%CO2 培养箱内静置培养。

        4. 组织块贴壁1-3d后,补充培养液。以后每隔2-3d换液1次。

        5. 植块培养3d后,细胞从植块边缘迁出。1周后,细胞向外迁移扩展,并逐渐分化,细胞的形态逐渐趋向正常食管黏膜上皮细胞的形态学特征。靠近植块的细胞体积小,类似基底细胞。外侧的细胞扁平,为分化的上皮细胞。2周后,细胞开始出现凋亡形态。3周后,近侧细胞减少,甚至消失。剩余的大部分细胞呈分化状态。

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