原代肠道上皮细胞培养

最重要的是注意污染，肠道本身细菌比较多，必须保持无菌操作,以避免细胞被细菌、真菌等微生物污染。

步骤

（1）C57BL/6 小鼠颈椎脱臼处死，喷适量酒精，滴加适量 Buffer 快速分离结肠；

（2）沿肠系膜剪开，DMEM 培养基清洗去除肠腔内容物；

（3）无菌剪刀将结肠组织剪成 1mm3 左右碎片；

（4）10 mL 0.1% 胶原酶 I 和 3% 分散酶 II 消化组织，37℃，摇床消化 25 min；

（5）吹打混匀，100 μm 细胞过滤器过滤，收集上清；

（6）相差消化法、差速贴壁法去除成纤维细胞；

（7）加入 1 mL 培养基重悬细胞，接种于培养瓶完全培养基中，37℃，5% CO2 细胞培养箱中培养；

（8）细胞长至培养瓶 80-90% 后用 5 g/L 的胰酶消化液消化，接种于细胞培养板。

常见问题

1. 实验前所有器械消毒，高压灭菌，液体无菌过滤；

2. 酶消化液现用现配；

3. 实验中注意充分消化以保证检测细胞量足够；

4. 尽可能充分去除成纤维细胞；

5. 用于后续培养需保证全程无菌操作。

可以借鉴一下下面这个文献参考:

原代肠道上皮细胞培养的方法文献如图