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        免疫组化之二步法介绍

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        如何实现完美的免疫组化实验

        二步法:EnVision System

        EnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体(即&NBS p;EnVision)直接放大信号40-50倍,把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点:敏感、省时、方便、背景低(避免了内源性生物素干扰)。

        EnVision工作程序:

        1) 脱蜡、水化组织切片。
        2) 预处理组织切片(据一抗具体说明而定)
        3) 蒸馏水漂洗,置于TBS中。
        4) 阻断内源性过氧化物酶(仅用于EnVisionTM/HRP)
        5) 蒸馏水漂洗,置于TBS,10分钟
        6) 一抗孵育10-30分钟
        7) TBS漂洗10分钟
        8) EnVisionTM孵育10-30分钟
        9) TBS漂洗10分钟
        10) 色源底物溶液孵育10分钟
        11) 蒸馏水漂洗
        12) 复染及封片

        免疫 染色方法
        The basic principles of ICC
        抗原 抗体反应
        • 标记化学反应
        • 呈色化学反应
        要求
        待检标本形态结构
        抗原 性保存良好,
        抗原 不从原位扩散
        或丢失

        Specimen preparation
        取材新鲜,固定及时,形态保存完好,抗原物质的抗原性不丢失、不扩散和被破坏
        • Fixation
        • Sample Type
        Cryostat (frozen) sections
        Paraffin Sections
        Antigen Retrieval Techniques
        • Intention: To facilitate the immunological reaction of antibodies with antigens (increase reactivity of the majority of antigens) .
        Antibody Staining
        • Primary antibody may be directly labeled
        • labeled secondary antibody or more complex detection system.
        • secondary antibody against the immunoglobulins of the primary antibody source
        减少或消除非特异性染色的方法
        • 最常见原因 蛋白吸附于高电荷的胶原和结缔组织成分上

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