• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        免疫组化非特异性染色及控制方法

        互联网

        5070

        一、非特异性染色的识别

        常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。

        二、非特异性染色的原因

        1. Ig与Fc受体结合

        多见于冰冻切片(特别是淋巴造血组织,淋巴细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二抗反应,因为一抗一般稀释度均较大,因此Fc受体的干扰基本不存在。由于福尔马林固定破坏了大部分的Fc受体,所以石蜡切片不多见。

        避免方法

        (1)用以二抗相同种族的正常血清封闭切片;

        (2)用不含Fc段的抗体,但价格贵。(V区,C1区不含Fc段,用Pepsin消化)

        2. 静电吸附

        抗体是一种带负电荷的球蛋白,容易和带正电荷的组织相结合,如胶原纤维。

        避免方法

        (1)尽量稀释一抗;

        (2)降低抗体的电荷,如用2.5%NaCl,0.05mTBS代替PBS;

        (3)用去垢剂如triton-100,Tween-20等处理切片。

        3. 二抗与组织中的Ig结合

        如羊抗兔的二抗,二抗可以标本中(人)Ig发生交叉反应,科学上越接近的动物,交叉反应越明显,如人与猴,兔与豚鼠。

        避免方法:用与待测组织相同的5%的正常血清稀释二抗。如人血清。

        4. 组织中残存醛基与Ig的结合

        醛类固定后未能彻底的冲洗,残留醛基可以和Ig结合。

        避免方法

        (1)彻底冲洗;

        (2)0.02%的新鲜的硼氧化钾液处理10分钟后冲洗。


        5. 内源性过氧化物酶

        红细胞,粒细胞的含量尤其高,镜下可以识别,不要将其当成阳性结果。

        避免方法

        (1)石蜡切片 0.3%双氧水-甲醇溶液处理切片;

        (2)冰冻切片 3%双氧水处理切片5分钟(99:1)因为未经固定包埋,大部分酶未被破坏;

        (3)对于骨髓涂片 最好用非过氧化物酶标记的抗体

        6. 内源性生物素

        以 24mg/ml的卵白素封片15分钟。

        7. 交叉反应

        PcAb敏感性高,但特异性稍低,容易出现非特异性染色。

        避免方法

        (1)尽可能稀释抗体;

        (2)尽可能用McAb。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序