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        如何收集细胞(用于western blot等)

        互联网

        37834

        问:

        我现在在养细胞,然后收细胞抽蛋白以及提RNA用,我想先多收点细胞冻着。想问一下怎样收集细胞,有具体的流程吗?

        我是这样做的:

        1、将细胞消化吹打后转移至离心管离心

        2、倒去上清,加1 mlPBS打匀后转移至1.5 ml EP管

        3、离心12000 rpm 2 min (不知道大家这里用多少转速,有讲究吗?)

        4、倒去上清,我是将EP管倒置一会,但是EP管里面还是有一些上清,我没有倒干净,请问是不是要倒干净上清啊?因为我暂时还不抽提,离心后EP管是放到-80度冰箱保存的。这个上清对抽蛋白和RNA有影响吗?

        答:

        1、1 ml的PBS可能溶不了那么多细胞(如果你细胞多的话),所以建议用3 mlPBS,分两管装,离完心后用Trizol溶解合成一管

        2、离心的速度太大了,细胞会死的,建议800 转,5 分钟,一般的细胞都可以离下来

        3、需要去上清,如果是提RNA就用Trizol溶解合成一管,然后放在-80度冰箱,如果提蛋白就直接将离心后的细胞放在-80度冰箱。上清对于提蛋白和RNA没什么影响。还有一点,提RNA的东西一定要高压,如果是初次做可以用DEPC水泡枪头,可以提高作成功的几率。如果操作严格,可以只把要用的枪头和EP管高压即可。其他的没什么特别的,流程跟你写的是一样的。

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