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        如何做好细胞爬片

        互联网

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        细胞爬片可以买专门的爬片,几块钱一小包的,爬片用前泡酸,高压消毒(包括镊子和枪头)。把用过的24孔板清洗干净,一孔一片,很方便,又互不干扰。把细胞培养到对数生长期,消化后再滴上去,爬1-2天贴壁后(中间可加适量培养液),可在板子里一直做完。清洗时,将PBS滴在片子上即可,不要剧烈摇晃。需要照相时候,再取出来,细胞面贴在载波片上,最好用50%甘油,中性树脂贴不好,容易毁坏细胞形态。取爬片时候,可以用枪头和镊子,或者用以下战友的方法。

        quhualing战友问:

        我是用293t细胞做细胞免疫组化,我们这里叫8-ohDG,我们是在24孔板做的,小片子处理好之后放到孔里,紫外线照1小时,之后就可以铺细胞了,我最大的问题是细胞培养24小时之后,镜下看挺好,但只要一洗细胞就会掉很多,几乎剩下的很少,还有一个问题最后一步染色一般要多长时间,我们有时不到一分钟染色就很重,请帮忙解答一下,谢谢。

        用什麽固定液,我们用丙酮,是不是固定液也很关键呀,我们固定10分钟

        答:小片子处理好之后放到孔里,紫外线照1小时,高压消毒后的小片子,不用再照了

        细胞培养24小时之后,镜下看挺好,但只要一洗细胞就会掉很多,几乎剩下的很少,

        贴壁时间可以延长,洗时候把PBS轻轻滴在片子上,不要摇。

        一步染色一般要多长时间,我们有时不到一分钟染色就很重,

        染色时间镜下观察确定,如果染色就很重,适当降低抗体浓度。

        玻璃片用冷丙酮(-20度)10-15分钟,可以的,如果放在24孔板里做,最好用甲醛,丙酮会腐蚀有机塑料的。

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