如何做好RNA质控

样品中RNA的纯度及整体质量对于后续的实验有重要的影响。

以下是进行PCR array前RNA质控的推荐标准：

定量：NanoDrop/Spectrophotometer（用于检测样本中的核酸浓度，蛋白与核酸的比例及是否存在污染，例如有机物/盐离子等污染）。请记录样品的浓度，230，260及280的吸光值。此方法无法评估RNA的完整性。

● 浓度：最佳浓度是100-150ng/uL。如果低于此浓度，可以使用PreAMP system或者通过浓缩的方法提高RNA浓度。可以通过配套的QIAGEN 过滤柱，减小洗脱体积来实现样品的浓缩。通过拨打QIAGEN客户服务热线400-880-0325，可以获得样品浓缩方面的帮助。

● 260/280比值：这一比值用于反应RNA浓度与蛋白浓度的比值。理想值应当在1.8-2.0，如果比值低于1.8，表明存在蛋白或其他污染。

● 260/230比值：这一比值用于反应RNA浓度与共提取污染的比值。理想值应当在1.8-2.2，如果比值低于1.8，表明存在有机物/盐离子等污染。这些污染会影响后续qPCR反应。

RNA完整性检测：

通过凝胶电泳或bioanalyzer来分析RNA的完整度，从而保证RNA的质量，防止RNA的降解对后续实验的影响。以下内容是RNA完整度的通用标准：

● 28S/18S比值：>1.5为高质量，1.3-1.5勉强可用，<1.3为较差质量

● RNA Integrity Number (RIN): > 7为高质量，6-7勉强可用，< 6为较差质量

RNA完整性的图例：（A）较好，（B）勉强可用，（C）较差

● 凝胶电泳的图例：泳道1，2为较好，泳道3勉强可用，泳道4为较差的质量