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        肿瘤细胞的原代培养方法

        相关方法:消化法原代培养实验

        互联网

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        肿瘤细胞对培养基的要求不如正常细胞严格,一般常用RPMI、DMEM、McCoy-5A等培养基,血清浓度不高,10%即可,建议最好在原代培养时能加入生长因子或原患者血清(1%-2%)以利细胞生长。培养方法很多,主要有组织块法、酶消化法、钽网法、脱落细胞法等。

        1.组织块法

        将取得的瘤组织去除脂肪、结缔组织及坏死部分,在平皿中用Hanks液洗3次,剪碎组织,切成1-2mm3小块,接种于事先涂有鼠尾胶原的培养瓶(或皿)中,37℃、5%CO2或加盖并塞在普通恒温箱中培养。

        2.酶消化法

        在上述的碎组织块中加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml胶原酶,在37℃水浴中消化30min或更长一些,去除消化液,用洗液洗3次,培养基洗1次后,用完全培养基悬浮,并用吸管吹打分散制成细胞悬液,计数。以(5-10)x108个/L细胞浓度,在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中,在37℃、5%CO2下分瓶(或皿)中培养。

        3.钽网法

        在一张面积约为1cm2的钽网上放入上述剪碎的一块或几块肿瘤组织块(1-2mm3大小),用镊子轻压,使其粘于网上,再把但网放入培养皿中,使网下的组织块与皿壁紧紧接触,于37℃、5%CO2下培养,每隔2-3天换液一次,5天后可见有上皮细胞从网上移出,并能在相当于肿瘤组织部位形成纯净的单层上皮细胞。

        4.脱落细胞法

        将新鲜的肿瘤组织去除脂肪和结缔组织,洗液洗2次后,用刀片将肿瘤组织切成细薄片,在切割的同时有许多上皮细胞脱落下来,脱落细胞经洗涤后,加入完全培养基,便可获得较纯的上层细胞,于培养瓶(或皿)中,37℃、5%CO2下培养,每隔2-3天换液一次,7-10天上皮细胞逐渐长成单层。

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