• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        QPCR的基础知识

        互联网

        73460

        问:什么是QPCR?

        答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实
        时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。

        问:QPCR、DNA检测、PCR之间的关系?

        答:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获93年诺贝尔化学奖。因其在病原体检测方面的独特优势,因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快,成为分子生物学诊断的主流,至今仍处于学术和应用前沿:

        第一代产品:

        基因扩增热循环仪(DNA Thermal Cycler)+电泳仪+紫外分析仪+定性试剂,构成PCR定性检测。

        第二代产品:

        基因扩增热循环仪+荧光仪+终点定量试剂,构成PCR-DNA终点法定量检测(End-point quantitative PCR detection),又分为终点酶免定量( End-point ELISA-PCR)和终点荧光定量(End-point Fluor-PCR)两种。

        第三代产品:

        实时定量QPCR仪+实时荧光定量试剂,构成QPCR-DAN/RNA实时荧光定量检测。

        问:相比以前的方法,QPCR有哪些特点?

        答:QPCR至少有以下特点:

        所用仪器少,只用一台仪器。

        检测时间短,只须45分钟~1小时10分钟(试剂各异),而定性PCR须3~4小时,酶免终点定量须6~8小时,荧光终点定量须2~3小时。

        操作极其简单:前处理后,样本插入仪器一小时后到电脑上来出报告即可,无须开盖,移样本(以前方法),避免污染。

        结果精确:定性PCR只能定性,很粗略,终点定量PCR由于只能在40个热循环结束后检测荧光,被测荧光达到饱和导致定量不够精确,属于半定量状态。而实时荧光QPCR是在扩增的每时每刻连续检测各样本的荧光值的变化。

        检测动态范围:10~10000000000 DNA copies/ml

        检测精度:0.1RLU

        辨别率:5000和10,000个模板拷贝样本的辨别率99.7%。

        问:QPCR的技术先进性、价格及应用现状?

        答:实时荧光QPCR是当今世界用于临床的最先进核酸分子诊断技术,被美国FDA承认并推崇,被美国FDA批准并取得临床应用执照的QPCR试剂品种有:

        HBV乙肝病毒DNA,HCV丙肝病毒RNA,HIV艾滋病病毒RNA,Chlamydi trachomatis(CT),性传播疾病,沙眼衣原体,Neiserria gonorrhea(NG),性传播疾病,淋病双球菌,Cytomegalovirus(CMV),性传播疾病,巨细胞病毒,Mybobacterium tuberculosis(Mtb),呼吸道疾病,结核分支杆菌等。

        实时荧光PCR仪研发技术难度大,门槛高,发达国家也只有有限几家知名公司生产,且售价昂贵:如
        美国ABI/7700-120万元,美国ABI/5700-50万元,瑞士Roche/Lightcycler-70万元,美国Stratagene公司2005年新品MX3005P-80万元

        可见,在病人看来,哪家医院应用了QPCR技术便是先进诊断技术的象征,在发达国家也是如此。

        国产仪器情况:国产仪器生产单位不超过五家,其中包括:

        日本独资杭州博日实时荧光QPCR仪(33孔)

        西安天隆科技有限公司TL988实时荧光QPCR仪(48孔)

        以上产品均取得国家SFDA认证,报价均在45万以上。

        国产试剂情况:

        多家公司生产实时荧光QPCR试剂盒,价格与终点法试剂相当,且品种齐全,价格便宜,购买方便:
        乙肝HBV-DNA,丙肝HCV-RNA,艾滋AIDSHIV-RNA,性病系列:淋病双球菌NG、沙眼衣原体CT、解脲支原体UU、疱疹病毒HSV、人体乳头瘤HPV,优生优育系列:巨细胞病毒CMV、弓形虫COX等。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序