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        植物原生质体的制备

        互联网

        15813

        原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的裸露部分。它在培养条件下,

        ①具有再生细胞壁,进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力;

        ②具有摄取外源大分子、细胞器,以及细菌,病毒的能力,因此是进行遗传操作,基因转移的好材料;

        ③通过同种和异种植物的原生质体融合,可产生异核体,实现体细胞杂交,培育出新品种。

        实验原理

        去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作,也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体的首推Klercker(1892),直到1960 年英国科学家Cocking 才第一次用酶法大量制备原生质体。本实验以植物的叶肉组织为材料,利用纤维素酶和果胶酶来消化细胞壁,分离细胞。

        实验用品

        器具:显微镜、离心机、离心管、剪刀(2)、镊子(2)、吸管、小培养皿、载片、盖片。

        试剂:0.16mol/L CaCI.2.H2O、20%蔗糖液、酶解液

        材料:油菜或菠菜或烟草

        实验方法步骤

        1、取材 根据实验目的和条件选取不同的材料

        2、分离原生质体

        ① 撕叶下表皮

        ② 酶解 将撕去下表皮的叶片剪成小块,放在盛有5mL 酶液的小培养皿中,让去除下表皮的一面接触酶液,辅满一层,在25~28℃下酶解60~90 分钟

        3、收集纯化

        (1)用吸管将酶解液吸至5mL 离心管中,以600rpm 离心5 分钟以上,使原生质体沉降

        (2)将上清(酶解液)回收,剩下原生质体及残渣于管底

        (3)加氯化钙液约2mL,轻轻吹打均匀

        (4)用注射器向离心管底部缓缓注入蔗糖约2—3mL,出现下部蔗糖液,上部原生质体悬浮液

        (5)以600rpm 离心10 分钟,在两液相之间出现一条绿色带,便是纯净的原生质体

        4、观察或培养

        取少许原生质体于载片上,盖片观察其形态,或者将原生质体接种在培养基上进行培养,再生植株

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