• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        植物原生质体细胞

        相关实验:电穿孔转染真核细胞实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  将小心切成5 mm 的条状无菌植物材料8 ml 原生质体溶液中温育,置于30℃旋转摇床上3~6 h。从中获取原生质体细胞。 

        2.  经80 μm 的尼龙筛网滤过除去沉渣,用4 ml 电穿孔缓冲液淋洗筛网。将原生质体细胞并入一个无菌的15 ml 锥形离心管中。

        3.  300 g 离心5 min,弃上清。加5 ml 植物电穿孔缓冲液,重复洗涤步骤。按1.5×106~2×106细胞/ml 的密度将原生质体细胞重悬于植物电穿孔缓冲液中。

        4.  同哺乳动物细胞一样进行电穿孔转染。开始时可用1~2 KV电圧及3~25 μF电容进行1次或几次电冲击,然后可在此基础上继续优化该体系。

        5.   培养48 h 后收集细胞,提取RNA,进行短晳基因表达分析,或选择稳定转化的细胞。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序