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        原代肺泡上皮细胞的体外分离培养

        互联网

        10933
        原代 肺泡上皮 细 胞 ( Primary Alveolar Epithelial Cell s ) 的体外分离培养

        1 、完全无血液残留肺 脏组织

        2、消化肺 组 织 :

        常用细胞消化酶:胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。

        经支气管将酶灌注到完整的肺中消化,或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。

        3 、分离 纯 化 细 胞 :

        原代肺泡上皮细胞的分离纯化主要方法:

        (1)密度梯度离心法:

        密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同,在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。 用ficoll或percoll不连续梯度离心法分离肺泡Ⅱ型上皮细胞。

        (2)滤膜分离法:

        肺泡Ⅱ型上皮细胞约10mm,比巨噬细胞(约25mm)和Ⅰ型细胞 (50mm-100mm)小,用150mm孔径的滤膜初滤除去大的组织碎片,30mm-40mm孔径的滤膜除去全部Ⅱ型细胞和部分巨噬细胞,采用 15mm的滤膜精滤。用滤膜分离操作简单,它和其他分离方法联合使用可以提高纯度。

        (3)流式细胞技术法:

        根据不同细胞之间的荧光差异,用荧光物质标记筛选。肺泡上皮细胞内含有丰富的脂类物质,用亲脂性荧光素标记,可以得到纯度很高的细胞。流式技术分离细胞的产量很低,但纯度极高。这种技术经过完善在将来会更有吸引力。

        (4)免疫黏附法:

        用IgG包被培养板,把肺泡上皮细胞悬液置于板上,巨噬细胞和其他大多数非肺泡上皮细胞因为含有Fc片段的受体而与IgG结合,吸附到板上,不黏附的肺泡上皮细胞被冲洗下来,简便易行,可除去绝大多数的巨噬细胞,有效的提高肺泡上皮细胞纯度。

        (5)贴壁选择法:
        贴壁选择原理:肺泡上皮细胞完成贴壁的时间不同,这种特性用肺泡上皮细胞培养时做筛选。

        总之,根据肺泡上皮细胞培养最终目的,综合几种方法能达到预期效果。

        例如:

        (1)先用滤膜过滤;

        (2)再用IgG包被法。

        4 、PriCells的产品

        (1) 原代肺泡上皮细胞, 5×105 细胞数/1ml

        (2) 原代细胞分离试剂盒

        (3) 原代细胞分离鉴定盒

        (4) 原代上皮细胞特制基础培养基

        (5) 原代上皮细胞培养特制添加剂
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