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        电转农杆菌感受态

        相关实验:农杆菌感受态细胞制备实验

        最新修订时间:

        原理

        电击法不需要预先诱导细菌的感受态,依靠短暂的电击,促使DNA进入细菌,转化率最高能达到109~1010转化子/μg闭环DNA。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤


        1.  挑取单克隆接种于2 ml YEP(含50 mg/l链霉素)液体培养基,28℃,250 rpm,振荡培养过夜。(如用5 mlYEP,需培养36 h)
         
        2.  将菌液按1:100转移至200 ml YEP(含50 mg/l链霉素)培养液中,28℃,250 rpm,振荡培养至OD=0.3(约4~5 h)。
         
        3.  转入50 ml的无菌离心管,4℃,4 000 rpm离心10 min,弃上清。
         
        4.   用20 ml冰浴的HEPES(1 mM,PH7.0)重悬。
         
        5.  4℃,4 000 rpm离心10 min,弃上清。
         
        6.  重复4、5步骤2~3次。
         
        7.  用2 ml冰浴的10%甘油重悬。
         
        8.  每管100 ul分装于1.5 ml无菌的Eppendorf管中,-70℃保存。
         
         
         
         

        注意事项

        HEPES需现用现配。

        来源:丁香实验

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