一步法制备和转化感受态细菌实验
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材料与仪器
步骤
1. 准备新鲜的过夜菌。按1:100的比例将过夜培养的菌液加入到新鲜的LB培养液中，于37 °C培养至OD600为0.3~0.4。
2. 加人等体积冰冷的2 X TSS于菌液中，在冰上温和地混匀。
3. 可以将菌液分成小份用干冰/乙醇浴冻存，于-70 °C长期保存。用冻存感受态细菌进行转化时，冻存菌要缓慢融化，并立即使用。
4. 为检测感受态的效果，按照步骤将<10 ng的pBR322转化到100 μl感受态细菌。按照CaCl2转化法的步骤8涂平板和计算转化效率。
转化效率大约为107~108转化子/μg DNA。
5. 迅速融化冻存菌，将100 μl感受态细菌和1~5 μl DNA （0.1~100 ng）加入到一个冰冷的聚丙烯管或玻璃管中，4°C放置5~60 min。
6. 加入0.9 ml含20 mmol/L葡萄糖的LB培养液，37°C温和振荡培养30~60 min。
7. 在平板上挑选转化体并保存。
2. 加人等体积冰冷的2 X TSS于菌液中，在冰上温和地混匀。
3. 可以将菌液分成小份用干冰/乙醇浴冻存，于-70 °C长期保存。用冻存感受态细菌进行转化时，冻存菌要缓慢融化，并立即使用。
4. 为检测感受态的效果，按照步骤将<10 ng的pBR322转化到100 μl感受态细菌。按照CaCl2转化法的步骤8涂平板和计算转化效率。
转化效率大约为107~108转化子/μg DNA。
5. 迅速融化冻存菌，将100 μl感受态细菌和1~5 μl DNA （0.1~100 ng）加入到一个冰冷的聚丙烯管或玻璃管中，4°C放置5~60 min。
6. 加入0.9 ml含20 mmol/L葡萄糖的LB培养液，37°C温和振荡培养30~60 min。
7. 在平板上挑选转化体并保存。
来源：丁香实验
