DNA电泳带型原因分析及解决办法
互联网
7516
- 相关专题
DNA跑完电泳后，需要进行带型分析，电泳图上的带型可能有出现许多状况。那么如何根据DNA电泳带型结果调整自己的实验呢?这里简单的做个介绍。
<center> <img alt="DNA电泳带型原因分析及解决办法" height="281" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/08/27/A1377590510.JPG" width="356" /></center>DNA电泳需要进行带型分析，在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此，对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂 糖电泳灵敏度稍高DNA降解避免DNA。
| 带型 | 原因分析 | 解决办法 |
| 弱带或无带 | 上样的DNA量不够 | 增加DNA的上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂 糖电泳灵敏度稍高 |
| DNA降解 | 避免DNA的核酸酶污染 | &NBS p; |
| 电泳时间过长，DNA跑出 | 减短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度 | &NBS p; |
| EB染色的DNA，紫外光源不合适 | 应用短波长（254 nm），增强紫外灯灵敏度 | &NBS p; |
| DNA带缺失 | 小DNA带走出凝胶 | 减短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度 |
| 分子大小相近的DNA带不易分辨 | 增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度 | |
| DNA 变性 | 电泳前请勿高温加热DNA链，以20 mM NaCl Buffer稀释DNA | |
| 巨大DNA链，凝胶电泳不合适 | 在脉冲凝胶电泳上分析 | |
| DNA带模糊 | DNA降解 | 避免核酸酶污染 |
| DNA上样量过多 | 减少凝胶中DNA上样量 | |
| 所用电泳条件不合适 | 电泳时电压不应超过20 V/cm，温度＜30℃，巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力 | |
| DNA样含盐过高 | 电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐 | |
| 有蛋白污染 | 电泳前酚抽提去除蛋白 | |
| DNA变性 | 电泳前勿加热，用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA | |
| 不规则DNA带迁移 | 对于λ/Hind III片段COS位点复性 | 电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟，然后在冰上冷却5分钟 |
| 电泳条件不合适 | 电泳电压不超过20 V/cm，温度＜30℃，电泳缓冲液有足够的缓冲能力 | |
| DNA变性 | 以20 mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳 |
