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        血清r球蛋白的分析测定-盐析法

        互联网

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        [目的与原理]

        应用盐析法测定血清r球蛋白含量。

        在血清中加入适量的硫酸铵及氯化钠溶液,使混合后此两种盐类的浓度分别为18.5%及2.9%,溶液的pH调节至r球蛋白的等电点(pH6.4),此时r球蛋白沉淀析出而其它蛋白质则留于溶液中。离心除去上清液,将沉淀溶于氯化钠溶液中,用双缩脲法测定蛋白质的量,此为血清r球蛋白含量

        [ 试剂与器材]

        试剂 :

        1、硫酸铵—氯化钠溶液:称取硫酸铵(A.R.或C.P.)195g及氯化钠(A.R.或C.P.)29.3g,溶于蒸馏水约700ml中。试测pH并用氨水或硫酸溶液调节pH至6.4(如准确测定pH有困难,这一步骤可省去)。将溶液全部转移入1L容量瓶中,用蒸馏水稀释至1L刻度。

        2、0.9%氯化钠溶液:称取氯化钠9.0g, 用蒸馏水溶解并稀释至1L。

        3、双缩脲试剂:见《血清(浆)总蛋白测定》。

        4、标准血清:见《血清(浆)总蛋白测定》。

        器材:

        可见分光光度计,离心机, 试管若干及试管架,旋涡混合器,500ml塑料试剂瓶,1L容量瓶,烧杯 2个,吸管若干支,滤纸,擦镜纸。

        [实验步骤]

        1、吸取硫酸铵—氯化钠溶液5.7ml,置于15ml尖底 离心管 中,加入血清标本0.30ml加塞,轻轻混和数次,然后将 离心管 放入冰 水浴 中15分钟。离心(3000转/分)10分钟。

        吸去上清液,再离心5分钟。用滤纸条将残留的液体尽量吸干,因为较多的硫酸铵可影响双缩脲显色,加入0.9%氯化钠溶液2.0ml,轻轻摇动使沉淀溶解,必要时可用细玻璃棒搅拌。此管即为“测定管”。另取同样的离心管2只,分别加入0.9%氯化钠溶液2.0ml,作为“空白管”及“标准管”

        2、3管中各加入双缩脲试剂8.0ml,混和,在室温放置30分钟,用540nm或绿色滤光片进行比色,以空白管校正光密度到0点,读取各管光密度读数。

        3、计算

        将所得光密度按下列公式计算r球蛋白量

        血清 r球蛋白(g/100ml)=测定管光密度/标准管光密度 × 0.1/0.3×标准 血清 蛋白含量。

        [方法评估]

        本方法用盐析法直接测定血清r球蛋白量,方法简便,稳定。与电泳法结果相似。但目前应用较为普遍的是电泳方法,其分离谱带成分多,样品用量少。

        [应用意义]

        血清蛋白可看作是 抗体 蛋白,其含量变化与机体免疫状态有关。

        [注意事项]

        1、本测定时先应熟悉双缩脲法的特点。如r球蛋白含量较高,测定管光密度超过标准曲线的直线范围,可用双缩脲试剂稀释液(双缩脲试剂8份加0.9%氯化钠溶液2份)进行稀释后再作测定,并将测得的结果乘以稀释倍数。

        2、本法不适用于测定血浆的r球蛋白,因血浆中的纤维蛋白原将与r球蛋白一并沉淀。

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