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        固定抗血清-稀释病毒法

        相关实验:病毒中和实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        (以细胞培养为例):①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8);


        ②取 0. 6ml不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 标准的抗病毒血清混合;


        ③再取 0.6ml 不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 已知的阴性血清混合;


        ④将混合液置 37℃ 水浴1h, 然后取 0. 2 ml 混合液分别接种于细胞已长成单层的 96孔细胞培养板中,每一稀释度接种 5孔,设 5 孔正常细胞对照;


        ⑤将细胞培养板置 37℃ 、 5% CO2 温箱中孵育,每日观察细胞病变效应 (CPE) 。


        ⑥中和试验的病毒 CCID50 的计算:细胞培养中,通常是以病毒的组织半数感染量 (CCID50/单位体积)作为中和反应的终点。而动物试验中,用动物半数致死量 (LD50/单位体积)作为中和反应的终点。中和试验中,抗血清组的 CCID50 与阴性血清组的 CCID50 之差的对数等于或大于2, 才能说明中和试验结果为阳性。

        常见问题

        用中和试验方法鉴定病毒时,将不同稀释倍数的病毒与标准的抗血清 (20个抗体单位/单位体积)混合、孵育,使二者充分反应,然后将混合液接种到敏感宿主体内,观察试验结果。

        来源:丁香实验

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