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        酵母核糖核酸的提取及组分鉴定

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        一、目的

        了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。

        二、原理

        酵母核酸中RNA含量较多,DNA少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,加入乙醇可使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA粗制品。

        三、器材

        1.干酵母粉

        2.天平

        3.烧杯

        4.抽滤瓶

        5.布氏漏斗

        6.移液管

        7.玻棒

        8.pH试纸

        9.离心机

        四、 试剂

        1.0.2%NaOH溶液

        2.乙酸(A.R)

        3.95%乙醇

        4.无水乙醚(C.P)

        5.氨水(C.P)

        6.10%H 2 SO 4 溶液

        7.5%AgNO 3 溶液:

        5g AgNO 3 溶于蒸馏水,定容至l00ml,贮于棕色瓶中。

        8.苔黑酚一三氯化铁 试剂

        9.定磷试剂

        五、操作

        1.RNA的提取

        称取4g干酵母粉于100ml烧杯中,加入0.2%NaOH溶液40ml,沸 水浴 中加热30min并经常搅拌。加数滴乙酸,使提取液呈酸性。4000r/min离心10~15min ,取上清夜,边搅边搅拌边加入95%乙醇洗涤两次,无水乙醚洗两次后,将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤,干燥后即得粗RNA。

        2.鉴定:

        取上述粗RNA0.5g,加10%H 2 SO 4 溶液5ml,加热至沸1~2min,制得RNA水解液。

        (1)嘌呤碱:

        取水解液2ml,加氨水2ml,5%NaOH溶液,观察是否产生絮状嘌呤碱的银化合物。

        (2)核糖:

        取水解液0.5ml,加苔黑酚-FeCI 3 ;试剂1ml,加热至沸1min,观察颜色变化。

        (3)磷酸:

        取水解液1ml,加定磷试剂1ml, 水浴 上加热,观察溶液是否变成蓝色。

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