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        酵母的培养与冻存

        最新修订时间:

        丁香实验推荐阅读

        合作专家 | 郭新容硕士

        临床医学 中南大学

        丁香实验推荐阅读

        审核专家 | 孔旭博士

        生物学 厦门大学

        简介

        酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种单细胞真核微生物,被广泛应用于科学研究、酿造和面点制作等领域。为了确保酵母在实验中的稳定性和可重复性,需要进行正确的培养和冻存。

        原理

        酵母的培养主要是通过液体培养基和固体培养基进行扩大培养。酵母冻存则是通过将酵母与保护剂混合后在低温条件下保存,以保持其活性和稳定性。

        用途

        酵母遗传学研究、酵母功能基因组学研究、酵母表达系统的构建和应用、酵母代谢工程。

        材料与仪器

        酵母菌、YPD 液体培养基(Yeast extract Peptone Dextrose)、YPD 琼脂平板、50%(质量/体积)甘油溶液、无菌移液器、移液管、培养皿、离心管、-80 ℃ 冰箱等。

        步骤

        1、酵母的培养

        1)选择培养基:

        酵母的培养基可以选择液态培养基或固体培养基。常用的液态培养基有 YPD 培养基(酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖培养基)、SD 培养基(合成培养基)、SC 培养基(选择性合成培养基)等;常用的固体培养基是 YPDA 培养基(YPD 培养基加入琼脂)。

        2)分离酵母:

        将酵母菌株分离于含有培养基的琼脂平板上,进行单菌落分离。

        ① 表面分离法:将待分离酵母样品通过悬浮于水表面的方法进行分离。将待分离酵母样品加入含有蒸馏水的试管中,用移液枪或自动移液器将悬浮液均匀地滴在含有琼脂的培养皿上,等待培养基凝固后进行培养。

        ② 液体稀释法:连续稀释法,即将待分离酵母样品加入含有蒸馏水的试管中,进行连续的梯度稀释。

        3)培养酵母:

        将分离得到的酵母菌落接种于液态培养基或固体培养基上,培养时需要注意温度、搅拌速度和氧气供应等因素。酵母的生长和繁殖速度较快,通常在 24~48 h 内就可以观察到生长。

        ① 液体培养:

        a. 准备培养基,将所需的上述液体培养基配好,灭菌后备用。

        b. 接种酵母菌:将酵母菌接种到一定体积的培养基中,无菌操作。

        c. 培养:接种好酵母的培养基放入摇床中,30 ℃,200 转/分钟,培养过夜。

        ② 固体培养:

        a. 准备琼脂:用天平称取适量的琼脂,加入适量的蒸馏水中,加热溶解后,灭菌并降温至约 50 ℃。

        b. 制备培养基:在琼脂液体温度约 50 ℃ 时,加入适量的培养基粉末,充分搅拌均匀。

        c. 装入培养皿:将制备好的培养基装入无菌的培养皿中,待培养基凝固后即可使用。

        2、酵母的冻存:

        1)选择冻存液:酵母的冻存液可以选择甘油、DMSO 等物质作为冻存液。

        2)制备冻存物:将培养的酵母菌株在对数生长期收获,加入等体积的冻存液中,混匀后分装于冷冻管中,放置于 -80 ℃ 或液氮中冷冻保存。

        3)解冻酵母:将冻存管取出放置于 4 ℃ 或常温下,等待完全解冻后接种于液态或固体培养基上进行培养。

        注意事项

        1. 在实验过程中,应保持无菌条件,避免污染。

        2. 如果要检测酵母的生长曲线,可以在不同时间点测量液体培养基中酵母的 OD600 值。

        3. 用甘油进行冻存时,需要尽量避免空气泡沫,因为空气泡沫可能导致冻存过程中细胞破裂。

        4. 为了确保酵母的活性和稳定性,建议每隔一段时间从冻存管中取出酵母进行复苏活化后再重新冻存,以维护酵母菌株的稳定性。

        5. 在复苏冻存酵母时,将冻存管从 -80 ℃ 冰箱中取出,尽快放入含有 YPD 液体培养基的培养瓶中,避免细胞受到温度波动的影响。

        6. 在选择酵母菌落进行液体培养时,要挑选形状规则、大小一致的酵母菌落,以确保培养的酵母质量。

        常见问题

        酵母菌在培养过程中出现生长缓慢、菌落形态异常:可能是培养基或实验操作问题,需要检查培养基成分和实验操作是否正确。

        来源:丁香实验

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