原位杂交组织化学基本程序
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原位杂交组织化学基本程序
根据所用探针的种类和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA－DNA杂交，DNA－RNA杂交和RNA－RNA杂交三类。因原位杂交多用于检测组织细胞内的mRNA及其表达，故DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交较多见，DNA-DNA杂交主要用于染色体原位杂交以对染色体中的DNA进行定位。
根据探针的标记物是否能直接检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。在直接法中。探针用放射性核素、荧光素或一些酶标记，探针与组织细胞内靶核酸所形成的杂交体可分别通过放射自显影、荧光显微镜或酶促呈色反应而直接显示。
直接法原位杂交操作步骤少，所需时间短，但由于没有杂交信号的放大，对一些低拷贝的靶序列检测的敏感性不够。间接法一般都用半抗原标记探针，最后通过免疫组织化学或亲和组织化学反应对半抗原定位，间接显示探针与组织细胞内靶核酸所形成的杂交体。
间接法原位杂交敏感性较直接法高，是最常用的原位杂交方法，荧光原位杂交也可用间接法进行。
尽管因核酸探针种类和标记物的不同，原位杂交技术在具体应用的方法上各有差异，但其基本方法和原则大致相同，可分为标本制备、杂交前处理、杂交反应、杂交后处理和杂交体检测五大基本步骤。
直接法原位杂交示意图
间接法原位杂交示意图
