流式细胞仪的使用操作流程（图）

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实验室的CT-流式细胞仪

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一.开机程序

1.检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。 　　

2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow)，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 　　

3.将FACSCalibur开关打开，此时仪器 功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5～10分钟。排出过滤器内的气泡。 　　

4.如果需要打印，打开打印机电源。 　　

5.打开电脑，等待屏幕显示出标准的苹果标志。 　　

6.执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡。 　　

7.分析样品时，先用FACAFlow或PBS进行HIGHRUN约2分钟。

做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管 ，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。

二.预设获取模式文件(AcquisitionTemplateFiles)

1.从苹果标志中选择Cell Quest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。 　　

2.选取屏幕左列绘图工具中的Dotplot，绘出一个或多个DotPlots(点图)。从DotPlot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。

3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram(直方图)。 　　

4.将此视窗命名后储存于FACStationG3BDApplicationsCELLQuestFolderEXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。

本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStationG3BDApplicationsCELLQuestEXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。

三.用CELLQuest进行仪器的设定和调整

1.从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。 　　

2.从屏幕上方Acquire指令栏中，选取ConnecttoCytometer(快捷键：+B)进行电脑和仪器的连机。将出现的AcquisitonControl对话框移至合适位置。 　　

3.从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。 　　

4.在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifiermode)：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时，FSC和SSC多以线性模式Lin测量，且DDMParam选择FL2，而FL1，FL2与FL3则以对数模式Log测量;

分析细胞DNA含量时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3皆以Lin进行测量，且DDMParam选择FL2;分析血小板表型时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以Log进行测量。