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        为什么pcr退火温度高,结果特异性强,退火温度低非特异多?

        互联网

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        PCR退火温度应如何设置?

        DNA 的双链主要是靠氢键联系在一起。

        退火温度越高,断开氢键的热能越大,引物 与模板越不易结合,反之,退火温度越低,越容易形成氢键,进行退火。

        所以当温度高时,只有碱基匹配程度高的,也就是模板与引物形成配对数越多的引物,才能结合到模板上,这样扩增出来的条带最少,甚至只有一条,也就是引物和目的序列的完美匹配, 因此特异性越高。

        反之,若退火 温度低,引物和模板匹配低时,也能稳定存在,那么模板上可能存在很多区域能和引物上的少量碱基匹配,进行引发,因此dna条带会很多,非特异带增加。

        特异带是指你的目的带。非特异带是pcr中扩增出的非目的带。

        退火是指温度下降,单链DNA与引物结合的过程。温度过低,可造成引物与模板之间只需有一小段可以互补配对就能配对,造成非特异性产物增加。而温度高时,需要引物与模版之间有较长的互补配对序列才能相互配对,特异性增强。

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