NKT 细胞激活剂 KRN 7000 α-半乳糖神经酰胺

◆ 原理

自然杀伤 T 细胞（NKT 细胞）被激活后会分泌大量的细胞因子，并能分化成具有细胞毒作用的效应细胞。临床研究发现 NKT 细胞参与部分疾病的调节，尤其是参与了自身免疫病，抗肿瘤 和器官移植的抗排斥反应的调节。特别是 NKT 细胞在一些自身免疫性疾病如硬皮病，I 型糖尿病及肝炎等具有免疫保护作用。

目 前已知对 NKT 细胞的刺激效应最佳的物质是脑苷脂-α-半乳糖酰基鞘胺醇（α-Galactosylcermaide,α-GalCer,KRN7000），这类物质来源于海绵动物。

1993 年由日本 Kyowa HakkoKirin 公司首次合成并命名。尽管 KRN7000 对 NKT 细胞的天然调节作用不明，但它作为一种 NKT 细胞强有力的活化剂，在体内体外实验中非常有 用，NKT 细胞通过这种机制活化后，随后会激活 NK 细胞。

◆案例 · 应用

案例 1

使 用 KRN7000 用于鉴定小鼠组织或者人血液样品中 iNKT 细胞（CD1d 限制性恒定 NKT 细胞）。iNKT 细胞受体由小鼠中恒定的 Va14Ja18/Vb8.2 和人 Va24Ja18/Vb11 组成。这两种物种的 iNKT 细胞抗原受体都识别 MHCI 样 CD1d 递呈的 a-galactosylceramide（a-GalCer,KRN7000）。

使用流式检测 a-GalCer 装置的 CD1d 二聚体即可进行分析。从 5~6 只小鼠胸腺，脾脏或者肝脏可以纯化 1×106 iNKT 细胞，大概需要 1~2 小时从小鼠组织制备单核细胞，用磁珠大概 1.5 小时富集细胞，4 小时用流式检测和纯化 iNKT 细胞。

如果样品是人的 PBMCs（外周血单核细胞），大概需要 2 小时，需要 5 ml 血液获得 5×106PBMCs，含有 500~25 000 iNKT 细胞。

摘自：Hiroshi Watarai, et al, Nature Protocol（2008） VOL.3 NO.1

案例 2

肉 状瘤病是系统失调疾病，可能与 Th1 应激有关。在患有 non-remitting 肉状瘤病病人外周血中 Va24NKT 细胞数目减少，但是在肉芽肿病灶部位这些细胞有积累。用 KRN7000 刺激来自上述病人外周血的 Va24NKT 细胞，IFN-gamma 的分泌量明显比正常人少，但是 IL-4 的水平差不多。只有在 Va24NKT 中观察到 IFN-gamma 分泌减少，在常规的 CN4 T 细胞中没有变化。表明 non-remitting 肉状瘤病与 Va24 NKT 不能分泌足够 IFN-gamma 有关，同时也说明 Va24 NKT 细胞在肉状瘤病的病理有关。

摘自：Seiichiro Kobayashi1,et al., International Immunolgy,Vol.16,No.2,pp 215-222

案例 3

KRN7000 是人和小鼠 NKT 细胞的配体，在各种小鼠体内实验模型中，比如皮下移植模型、肝脏或者肺的转移模型等，KRN7000 可刺激产生干扰素（IFN），起着抗肿瘤活性的作用。在肝脏转移模型中，使用 KRN7000 治疗后，能够抑制肿瘤生长，延长小鼠寿命。据报道，在患有传染病，自身免疫性疾病和移植物抗宿主病等小鼠身上使用 KRN7000 后，会产生免疫效果。