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        造血干细胞的制备

        相关实验:动物成体干细胞制备技术

        别名:UCMSCs

        最新修订时间:

        简介

        造血干细胞是迄今为止研究得最为透彻的成体干细胞,可以用两个特征来定义造血干细胞:一是可以进行自我更新,二是可产生所有血细胞类型。经过近 50 年的研究,人们对造血干细胞的了解不断深入,造血干细胞早已应用于临床,用于治疗癌症、血液疾病以及一些免疫系统疾病,同时有分化成除血细胞以外的细胞类型的能力,如神经细胞、肌肉细胞以及肝细胞等,与其他成体干细胞相比有不可比拟的优势。

        材料与仪器

        器材:

        ① 2 把尖解剖剪:长 10 cm,两个 Perry 镊:长 12.5 cm;注射器

        ② 200 目筛网
        ③ 100 mm 培养皿、15 ml 离心管
        ④ 离心机、培养箱
        ⑤ 7 号针头、4 号半针头

        试剂:

        ① PEB 缓冲液 含有 0.5% 牛血清蛋白(BSA)和 2 mmol/L EDTA 的 PBS

        ② HSC medium STEMSPAN+50 ng/ml TPO + 50 ng/ml FL + 50 ng/ml SCF + 10 ng/ml IL-3 + 10 ng/ml IL-6 + 10% FBS

        ③ PBS(1000 ml):0.57 g Na,HPO4 + 8 g NaCl + 0.25 g KCl + 0.25 g KH2PO2

        ④ 肝素
        ⑤ 甲基纤维素
        ⑥ Ficoll 淋巴细胞分离液(d = 1.077)

        步骤

        造血干细胞的制备的基本过程可分为如下几步:

        1. 肝素抗凝的脐带血按 1:1 的比例与 PBS 混匀。

        2. 再按 4:1 比例与 0.5% 甲基纤维素混匀,静置沉淀 45 分钟。

        3. 吸出上清,置于 50 ml 离心管中,1500 r/min 离心 5 分钟。

        4. 弃上清,加 5 ml 的 PBS 重悬细胞。

        5. 缓慢沿管壁加入 5 ml 细胞悬液到 5 ml 淋巴细胞分离液(Ficoll),1500 r/min 离心 20 分钟,分离出单个核细胞。

        6. 收集薄膜层的单个核细胞,PBS 洗涤,PBS 重悬细胞计数备用。

        7. 利用分选仪器进行 CD34 细胞分选。

        来源:丁香实验

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