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- 2025年07月14日
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- 提供商：
raybiotech
- 服务名称：
单克隆抗体制备技术服务
- 规格：
1ml
单克隆抗体制备技术服务
本项技术服务主要包括：
- Balb/c纯系小鼠免疫；
- 脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合；
- 抗体产生细胞的ELISA筛选；
- 抗体产生细胞的亚克隆与扩增；
- 指定细胞克隆的体外培养或腹水瘤接种法生产单克隆抗体。
1、抗原表位设计
使用特有分析软件，以在线分析方法为辅助，综合蛋白三维结构、活性位点、亲水性等因素，多参数预测抗原表位，大大提高了抗原表位的可靠性，为后续的抗体制备提供了有力保证。
2、多肽合成
包括：标准肽合成、肽修饰、不同纯度多肽处理、抗原多肽及其与蛋白的交联等。
3、重组蛋白抗原制备
1）重组质粒构建
2）质粒转化
3）诱导表达
4）蛋白纯化
5）蛋白鉴定
所得到的重组蛋白，具有较高的纯度和活性，可用于免疫动物以获得单克隆抗体。
4、杂交瘤制备
1）免疫动物：免疫动物的选择根据骨髓瘤细胞株的来源而定，常用的骨髓瘤细胞均来自Balb/c小鼠。免疫原可为：可溶性抗原、颗粒性（细胞）抗原。
2）骨髓瘤细胞的培养。
3）饲养细胞的制备。
4）细胞融合。
5）HAT筛选。
5、筛选分泌抗体的杂交瘤细胞
一般常用的有：免疫荧光、放射免疫（RIA）、组织化学法和酶联免疫分析（ELISA）法等，以ELISA方法最为常用。
6、杂交瘤细胞的克隆化培养
经检测的杂交细胞虽然分泌抗体，但它可能是一个杂交细胞，也可能是多个杂交细胞的后代所分泌的抗体，因此必须进行克隆化培养，以获得得一个既有克隆原性又分泌抗体的杂交瘤细胞株。
7、单克隆抗体的大量制备
杂交瘤细胞建成之后，需要制备大量抗体以备使用。把杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔内，在杂交瘤生长的同时渗出大量腹水，腹水含有抗体，每毫升可达到毫克水平，是目前广泛采用的方法。
8、抗体纯化
通常讲单克隆抗体已经是很纯的，在实验研究中可以使用，但由于它的来源不同，可能会含有培养
9、抗体鉴定
杂交瘤细胞建株后，还需对其所分泌的单克隆抗体的理化性质及对抗原的特异性等进行鉴定，通常需进行以下工作：抗原本身的IgG亚类测定；所抗抗原分子量的测定；Western blot鉴定；ELISA效价鉴定等。
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文献和实验1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来
1. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。2. 单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
一、实验目的： 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。 二、实验原理： 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养
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