贴壁细胞总是成团贴壁？

常见几点原因及建议:

1.消化的过程过于粗暴，吹打太用力，消化过久，消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团。

2、细胞离心速度过大或时间太长，也容易造成细胞抱团。

3、消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。

4、状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长得太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。

5、传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。

6、非震荡培养或细胞量过多的话就会成团。

如果你培养的细胞是悬浮细胞，如Jurkat细胞，它生长时就是会成团的，而且会越来越大。如果培养的是贴壁生长的细胞，出现抱团，也要分情况。

1 如果细胞正常生长，且未长满，只是部分细胞抱团互相叠在一起，那最大的可能就是在上一次消化细胞时，没有把细胞悬液彻底吹散，有部分细胞团块直接种下去培养瓶内了，因此会出现这种情况，对应的解决办法就是等下一次消化时，用移液器彻底吹散细胞悬液，然后再种细胞到培养瓶内。

2 如果细胞生长不正常，例如很多细胞都成团了，且浮起来了，那大概率是被污染了，那些成团的细胞是死掉的细胞，或者是微生物团块。此时没有挽救的办法，只能扔弃。

3 如果细胞生长正常，且长满，出现部分细胞堆叠在一起，成团了，那说明培养空间不足了，细胞只能叠在一起生长，这种情况比较罕见，因为只要细胞长满瓶底，就会发生接触抑制，一般是不会再继续长的。

建议可以考虑以下几点:

1. 优化细胞培养基成分,如适当增加细胞粘附因子等,改善细胞生长状态。

2. 调整细胞种植密度,过稀或过密都会导致细胞聚集。需测试最佳密度。

3. 更换细胞培养皿/瓶,不同表面处理也会影响细胞贴壁。可测试不同材质。

4. 改进传代技术,避免细胞聚集过度。适当洗涤分散细胞。

5. 观察是否存在污染现象。严格按无菌操作流程,更换无菌器具和试剂。

6. 如果聚集不严重,可直接给予干预。但要监测细胞状态,如出现大量死亡则需终止。

7. 聚集严重时,建议先传代或更换细胞批次,恢复正常生长状态后再进行实验。

8. 重复实验时控制条件尽可能一致。结果差异可能由聚集状态引起。

希望以上建议可以帮助您解决细胞培养中的聚集问题,祝实验顺利!

贴壁细胞总是成团贴壁，很可能的原因还是因为胰酶用量不够或者吹打不均匀造成的，对细胞实验还是会有影响的，不建议这样实验。