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流式细胞术检测实验
实验分类：
实验动物
别名：
FACS
最新修订时间：
简介
流式细胞仪操作规则：光学系统（以 BD FACSCalibur 为例）
BD FACSCalibur 基本配有一支波长 488 nm 的氩离子激光：
FSC Diode 只收 488 nm 波长散射光
SSC PMT 只收 488 nm 波长散射光
FLIPMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长 515～545 nm）
FL2PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长 564～606 nm）
FL3PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 ＞ 650 nm）
细胞样品准备要求：
1. 理想样品浓度调至（1～10）x 10 cells/mL，一般实验只需 0.5 mL 的样品。
2. 细胞样品务必放至 BDFALCON352052 试管中，否则无法上机。
3. 上机前务必去除样品中之细胞团块，以防管路堵塞，可使用附滤网 BDFALCON 试管(Cat.No.352235）或 35～55 mm 的尼龙筛网。
4. 供流式分析的样品是单细胞悬浮液，而且大部分样品都需经荧光染色。表面抗原荧光染色的方法大致有两种：直接免疫荧光和间接免疫荧光染色。
来源：丁香实验团队
操作方法
流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数的基本过程可分为如下几步：A 收集 E14.5 胎肝细胞，1 mL 注射器分离胎肝成单细胞悬液，并用细胞滤器过滤细胞悬液。B 胎肝总细胞数计数。C 2％ FBS/PBS 液洗一次。D 分别加入 c-Kit-APC（1:800），Sca-1-FITC（1:800），phycoerythrin-conjugated lineage mark
流式细胞术检测胎肝细胞凋亡流式细胞术检测胎肝细胞凋亡的基本过程可分为如下几步：A 收集胎肝细胞，用 1 mL 注射器分离胎肝成单细胞悬液，并用细胞滤器过滤细胞悬液。B PBS 液洗一次，1000～2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清，收集细胞。C 用 PBS 轻轻重悬细胞并计数。D 取 5 万～10 万重悬的细胞，1000～2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清。E 加入 195 μL Annexin V-F
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