酶免疫技术

ELISA的原理和类型1.　ELISA的原理　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的 ...

Cellular ELISA ProtocolFormalin Fixed Cell Plates1. Trypsinize confluent flasks2. Pool and count cells3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes4. Resuspend to the appropriate concentration in complete medium4 x 105 cells/ml for epithelial cells2 x 105 cells/ml for fibroblast cells5. ...

ELISA技术中的抗原与抗体的反应抗体1.2.1　抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（ ...

cAMP/cGMP（环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷）是一种环状核苷酸，以微量存在于动植物细胞和微生物中。有人称其为细胞内的第二信使，而称激素为“第一信使”。cAMP（或cGMP）由腺苷酸（或鸟苷酸）环化酶产生，而被磷酸二酯酶降解，因此激活腺苷酸（或鸟苷酸）环化酶或者抑制磷酸二酯酶可以提高细胞内cAMP（或cGMP）的含量。研究发现，cAMP（或cGMP）特异性磷酸二酯酶的抑制剂可用于人类疾病的治疗。如cAMP的封闭剂，增强β肾上腺 ...

我现在做elisa，目的是利用此法来检测我样品中蛋白的浓度，我用的是改良的双抗体夹心法，就是包被鼠单抗，加标准品和待测样品，再加兔多抗，再加山羊抗兔的酶标二抗，TMB显色。我现在的问题是摸索单抗和多抗的稀释度，所以就将多抗稀释了三个浓度1:5000,1:10000,1:15000,1:20000，单抗 包被稀释度是1:15000，标准品都是五倍稀释即：25μg/mL , 5μg/mL , 1μg/mL , 0.2μg/mL , 0.04μg/mL 酶标二抗是1:5 ...

1. ELISPOT包被抗体：1. 按1：200比例稀释，将包被抗体加入到4℃储存的1×PBS中，在ELISPOT平板每孔中加入100μl稀释后的包被抗体；2. 置于4℃冰箱封闭过夜（16小时）；封闭：3. 弃去包被抗体稀释液。每孔加入200μl含10%牛血清的RPMI1640培养基清洗，放置2分钟；4. 每孔加入200μl的含10%牛血清的RPMI1640培养基，室温放置2小时；刺激细胞：5. 弃去每孔中的200μl的含10%牛血清的RPMI 16 ...

ELISA实验质量控制问题BIOX.CN 2004-9-7 14:52:52来源：生命经纬　　从1949年美国College of American Pathologists（简称CAP）首先开始研究临床实验室室内质量控制（简称质控）问题，美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。　　到70年代，实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量管理，推行GoodL ...

　　完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定　　　中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。3.1　免疫吸附剂　　已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载 ...

北京基谱生物科技有限公司技术服务SOP文件ELISA取样及运输注意事项一、血清提取方法：1.全血促凝管取血，轻轻颠倒两三次，放置片刻让全血凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。2.全血普通EP管取血，室温放置2h左右，让其凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。特别注意：取血清避免震荡，以防止溶血，溶血会对结果有影响。二、样本取量及运输每个指标做单孔检测，一个样本需取血清30ul，3个复孔需90 ul ...

我做的间接ELISA，用猪血清作为包被抗原，兔抗体作为一抗，HRP－羊抗兔作为二抗。阳性的反应基本正常，而且抗体效价不错。可就是阴性对照老是很高，使用小牛血清封闭好想基本没有效果（我试过用pH7.4 的pbs和pH9.6 的cbs 稀释1%、5％、10％浓度的小牛血清，另外还有明胶）。以下是我昨天做的一个结果，一抗从1：12800稀释(阴性阳性均同)，抗原从1.25ug/ml开始包被，都是倍比稀释。1234563.0273.0463.00 ...

经过一番摸索，现在我所作 的间接ELISA的阴性本底总算降下来了。不过我不知道该怎样判断那个值有效.贴出来，请高手指点一下。（以下是筛选抗原抗体最佳工作浓度的）1234563.5523.7953.5523.2512.5851.8821.8511.1930.7150.4020.2890.1814.1143.6713.1072.2291.4140.9541.2430.6960.4090.2170.1500.1262.4341.6071.2 ...

近来许多客户向我们反映一些唯利是图的公司和小作坊，用假冒伪劣的ELISA试剂盒坑害广大的科研工作者，他们往往唯利是图，无视科学研究的严谨性和严肃性，让广大的科研工作者被动造假，严重扰乱了科研工作，严重扰乱了市场秩序，所以我们有义务，有责任揭露这些作伪造假者制作假冒伪劣ELISA试剂盒的手法，同时提供如何鉴别这些假冒伪劣ELISA试剂盒的方法，供广大的科研工作者和用户参考，让那些挂羊头卖狗肉，冒牌进口试剂，以及 ...

1. ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质 ...

德国IBL儿茶酚胺类ELISA试剂盒优惠大促销！5.5~7.5折！德国IBL国际有限公司是一家有着近30年经验的专业医疗诊断试剂研发制造商，其产品均已经通过ISO9001、ISO13485和欧洲CE认证，并且通过了美国FDA的认证。公司产品系列包括生物胺系列、传染病系列、新生儿筛查系列及不孕系列等ELISA产品及放免产品。深圳市科润达生物工程有限公司，为德国IBL公司中国（含港澳地区）独家代理商！现我公司推出德国 ...

一篇文献中的ELISA方法如下：Control peptides (14–17 amino acid sequence near the N-terminal or C-terminal of the studied protein) and the reactive rabbit anti-defensin antibodies (affinity pure) were obtained from Alpha Diagnostics .CoStar flat-bottom high-binding ELISA plates were c ...

1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液：10%(w/v)0.1gSDS ...

PLA技术全称为Proximity Ligation Assay，国内译为邻位连接或者邻近连接技术。PLA技术是一种特殊的免疫分析方法，可用于检测目标蛋白，蛋白相互作用等等。该方法通过一对标记有一段寡聚脱氧核苷酸(单链DNA)的单克隆或者多克隆抗体的探针，即PLA probe（探针），识别目的蛋白，当这两个探针识别同一个蛋白时，两个探针之间的距离靠近，产生了所谓的邻近效应（proximity）。此时，通过加入一段分别与连接在抗 ...

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗 ...

ELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。因此在做ELISA实验时，一定要注意以下几点。一、ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。3、要在实验前1小时将试 ...

第1节- 试剂1.1涂层缓冲液PBS（137 mM氯化钠，2.7 mM的氯化钾，8.1 mM的磷酸氢二钠，1.5 mM磷酸二氢钾）1.2封闭液5％脱脂乳于PBST中（0.05％Tween-20）1.3稀释剂2％脱脂乳于PBST中（0.05％Tween-20）1.4柠檬酸缓冲液3.65克柠檬酸，4.76克磷酸氢二钠，溶解于500毫升双蒸水1.5兔抗GST抗体兔抗GST抗体1.6 HRP结合山羊抗兔IgG（H + L）山羊抗兔IgG（H + L），結合过氧化物酶第2节- 分析方法注 ...